عنوان

بررسی مکانیسم های مولکولی مقاومت به آنتی بیوتیک کولیستین در باکتری ‮‭Klebsiella pneumoniae‬,‮‭Assessing the molecular mechanisms of colistin resistance in Klebsiella pneumoniae‬

Number

‭۲۰۳۴۳پ‬

.Language of Text, Soundtrack etc

per

Title Proper

بررسی مکانیسم های مولکولی مقاومت به آنتی بیوتیک کولیستین در باکتری ‮‭Klebsiella pneumoniae‬

Parallel Title Proper

‮‭Assessing the molecular mechanisms of colistin resistance in Klebsiella pneumoniae‬

First Statement of Responsibility

/افسانه جوانی

Name of Publisher, Distributor, etc.

: علوم طبیعی

Date of Publication, Distribution, etc.

، ‮‭۱۳۹۶‬

Name of Manufacturer

، میرزائی

Specific Material Designation and Extent of Item

‮‭۱۰۰‬ص‬

Text of Note

چاپی - الکترونیکی

Dissertation or thesis details and type of degree

کارشناسی ارشد

Discipline of degree

زیست شناسی گرایش بیوشیمی

Date of degree

‮‭۱۳۹۶/۱۱/۱۸‬

Body granting the degree

تبریز

Text of Note

آنتی بیوتیک کولیستین یکی از آخرین گزینه های درمانی برای مبارزه با عفونت های ناشی از باکتری های گرم منفی مقاوم به چند دارو، به ویژه کلبسیلا پنومونیه می باشد .اگرچه مقاومت به کولیستین به ندرت اتفاق می افتد ولیکن مقاومت به آن در چند مورد از باکتری های گرم منفی گزارش شده است .در این پروژه مکانیسم های مقاومت به آنتی بیوتیک کولیستین در ‮‭۲۰‬ جدایه ی مقاوم و ‮‭۳‬ جدایه ی حساس بررسی شدند .وجود ژن های مقاومت کد شونده توسط پلاسمید‮‭۱- mcr‬،‮‭۲- mcr‬،‮‭mcr‬ - ‮‭۳‬و‮‭mcr‬ - ‮‭۴‬در جدایه های مورد مطالعه به روش ‮‭PCR‬ بررسی شد .همچنین توالی نوکلئوتیدی ژن های ‮‭pmrA‬ ، ‮‭pmrB‬ ، ‮‭mgrB‬ ، ‮‭phoP‬ و ‮‭phoQ‬ تعیین شد .به منظور بررسی ارتباط بین مقاومت به کولیستین و افزیش بیان اپرون های ‮‭pmrHFIJKLM‬ و‮‭pmrCAB‬ ، سطح رونویسی ژن های ‮‭pmrK‬ و) ‮‭pmrC‬ کدکننده ی آنزیم های تغییر دهنده ی ( ‮‭LPS‬ به روش‮‭qPCR - RT‬مورد بررسی قرار گرفت .هیچ کدام از ژن های پلاسمیدی در جدایه های مورد مطالعه شناسایی نشدند .در ‮‭۱۵‬ جدایه مقاوم‮‭(۷۵‬ درصد (غیرفعال شدن ژن ‮‭mgrB‬ به واسطه ی موتاسیون ها و وارد شدن عناصر الحاقی مشاهده شد .عناصر الحاقی شامل خانواده های‮‭like - IS۵‬و‮‭like - IS۱‬بودند که عمدتا مناطق کد کننده ی ژن ‮‭mgrB‬ و تنها در یکی از جدایه ها منطقه ی پروموتر ژن ‮‭mgrB‬ را مورد هدف قرار دادند .تست تکمیلی انجام شده با تیپ وحشی ژن ‮‭mgrB‬ قادر به بازگشت فنوتیپ وحشی) حساسیت به کولیستین (در جدایه های با تغییرات ژنتیکی در این ژن بود .هیچ یک از جدایه های مورد مطالعه در این پروژه، تغییری در ژن های ‮‭pmrA‬ ، ‮‭phoP‬ و ‮‭phoQ‬ نداشتند .همچنین به روش تست تکمیلی نشان داده شد که جایگزینی های ژنتیکی ایجاد شده در ژن ‮‭pmrB‬ در مقاومت به کولیستین نقشی ندارند .مقاومت به کولیستین با افزیش بیان اپرون های ‮‭pmrHFIJKLM‬ و ‮‭pmrCAB‬ مرتبط بود طوریکه ژن های ‮‭pmrK‬ و ‮‭pmrC‬ به ترتیب در ‮‭۲۰‬ و ‮‭۱۲‬ سویه مقاوم به کولیستین افزایش بیان داشتند .نتایج ما نشان داد که تغییرات پروتئین ‮‭MgrB‬ مکانیسم اصلی دخیل در مقاومت به کولیستین در جدایه های کلبسیلا پنومونیه ی ایرانی است

Text of Note

Colistin is one of the last-resort therapeutic agents to combat multidrug-resistant Gram negative bacteria (GNB) including Klebsiella pneumoniae. Although it happens rarely, resistance to colistin has been reported for several GNB. A total of 20 colistin resistant (col-R) and three colistin susceptible (col-S) clinical isolates of K. pneumoniae were studied to explore the underlying mechanisms of colistin resistance. The presence of plasmid encoded resistance genes, mcr-1, mcr-2, mcr-3, and mcr-4 genes were examined by PCR. The nucleotide sequences of pmrA, pmrB, phoP, phoQ, and mgrB genes were determined. To evaluate the association between colistin resistance and upregulation of pmrHFIJKLM and pmrCAB operons, transcriptional level of the pmrK and pmrC genes encoding for lipopolysaccharide target modifying enzymes was quantified by RT-qPCR analysis. None of the plasmid encoded resistance genes were detected in the studied isolates. Inactivation of MgrB due to nonsense mutations and insertion of IS elements was observed in 15 col-R isolates (75 ). IS elements (IS5-like and IS1-like families) most commonly targeted the coding region and in one case the promoter region of the mgrB. Complementation with wild-type MgrB restored colistin susceptibility in isolates with altered mgrB. All col-R isolates lacked any genetic alterations in the pmrA, phoP, and phoQ genes and substitutions identified in the pmrB were not found to be involved in resistance conferring determined by complementation assay. Colistin resistance linked with upregulation of pmrHFIJKLM and pmrCAB operons with the pmrK and pmrC being overexpressed in 20 and 12 col-R isolates, respectively.Our results demonstrated that MgrB alterations are the major mechanism contributing to colistin resistance in the tested K. pneumoniae isolates from Iran

Parallel Title

‮‭Assessing the molecular mechanisms of colistin resistance in Klebsiella pneumoniae‬

جوانی، افسانه

Javani, Afsaneh

هائیلی، مهری، استاد راهنما

بابایی، اسماعیل، استاد مشاور

فیض آبادی، محمد مهدی، استاد مشاور

Public note

سیاه و سفید

نمایه‌سازی قبلی