بررسی روند aging وaging - antiبر روی سلولهای بنیادی مزانشیمی مشتق از بافت چربی و مغز استخوان با تاثیر نانوتیتانیوم و عصاره آویشن شیرازی
First Statement of Responsibility
/منیژه ساریخانی قلعه باباخانی
.PUBLICATION, DISTRIBUTION, ETC
Name of Publisher, Distributor, etc.
: دامپزشکی
Date of Publication, Distribution, etc.
، ۱۳۹۶
Name of Manufacturer
، میرزائی
NOTES PERTAINING TO PUBLICATION, DISTRIBUTION, ETC.
Text of Note
چاپی
DISSERTATION (THESIS) NOTE
Dissertation or thesis details and type of degree
دکتری
Discipline of degree
دامپزشکی
Date of degree
۱۳۹۶/۰۶/۰۸
Body granting the degree
تبریز
SUMMARY OR ABSTRACT
Text of Note
اصطلاح سلول بنیادی توصیف کننده سلولی است با پتانسیل بالا که در طی فرایندی با عنوان خودنوسازی و همچنین تمایز به انواع مختلف سلولصها جهت ساخت اولیه بافتصها و ترمیم بافتصهای آسیب دیده بدن موجود زنده تبدیل میصشود .پیشرفت فناوری نانو و کاربردهای وسیع نانو ذرات در صنایع مختلف باعث شده است که بررسی اثرات مخرب نانو مواد بر روی موجودات اهمیت زیادی داشته باشد .امروزه از نانو تیتانیوم در تولید انواع رنگ، خوراک، لوازم آرایشی و بهداشتی، و بسیاری از موارد دیگر استفاده میصشود .همچنین گیاه آویشن در ایران به عنوان طعم دهنده در انواع غذاها کاربرد دارد ولی اثرات متفاوتی مثل ضدعفونی کننده، بیهوشی، ضد اسپاسم ، ضد تشنج و ضد میکروبی نیز دارد .عصاره متانولی برگ و گل این گیاه نیز اثرات آنتی اکسیدانی دارد .هدف از این مطالعه تاثیر گیاه آویشن شیرازی و نانوتیتانیوم را در جلوگیری از روند پیری بروی دو رده سلولصهای بنیادین مغز استخوان و سلولصهای بنیادی مزانشیمی مشتق از بافت چربی در رت مورد بررسی قرار گرفت.ابتدا سلولصهای بنیادی مورد نظر را از مغز استخوان و چربی مزانتر رت استخراج شد، و بنیادینگی سلولصهای استخراج شده توسط روش فلوسایتومتری با کمک CD مارکرهای بنیادینگی(CD۴۵،CD۹۰ ، CD۱۰۵ و (CD۳۴ ، مورد تایید قرار گرفت .دین منظور سلولصها برای مدتی، تیمار شدند تا از فرایند تمایز در آنها جلوگیری شود .به دنبال آن، برای ارزیابی سیتوتوکسیستی هر کدام از این مواد، ابتدا سلولصهای بنیادی مشتق از بافت چربی با نانوتیتانیوم با غلظت-های) g/ml۵۰،۷۰،۱۳۰،۱۵۰،۱۷۰،۲۰۰،۲۴۰، ۲۸۰)به مدت۱ و۲و ۴روز و عصاره گیاه آویشن شیرازی با غلظتصهای) g/ml۱۰،۲۵،۵۰،۱۰۰،۱۳۰،۲۰۰،۳۱۲، ۵۰۰)به مدت۱ و۲ و ۳ روز تیمار شدند، و سلولصهای بنیادی مغز استخوان با نانوتیتانیوم با غلظتصهای) g/ml۱۰،۵۰،۱۰۰،۲۰۰، ۳۰۰)به مدت۱و۲و ۵روز و عصاره آویشن شیرازی با غلظتصهای) g/ml۱۰،۱۰۰،۲۰۰، ۵۰۰)به مدت۱ و ۲روز تیمار شد ند و با تست MTT مورد ارزیابی قرار گرفتند .از رنگ آمیزی بتا گالاکتوزیداز برای تایید پیری در سلولصهای تیمار شده با مواد مورد نظر استفاده شد .بعد به منظور تعیین میزان بیان ژنصهای مارکر پیری P۵۳) و (Nanog از روشPCR - Real Timeاستفاده شد .در تست بعدی تاثیر نانوتیتانیوم با غلظت بهینه g/ml ۱۵۰و g/ml ۱۰۰به ترتیب بر روی سلولصهای بنیادی مغز استخوان و مزانشیمی بافت چربی و همچنین تاثیر عصاره آویشن شیرازی با غلظت g/ml ۱۰۰برای هر دو رده سلولصهای بنیادی، بروی چرخه سلولی، با فلوسایتومتری بررسی شد .نتایج بدست آمده از تست فلوسایتومتری با کمک CD مارکرها، بنیادینگی سلولصهای بنیادی مشتق از بافت چربی استخراج شده را تایید کرد .در تستMTT ، نانوتیتانیوم در غلظتg/ml ۲۰۰و g/ml ۱۰۰به ترتیب برای سلولصهای بنیادی مزانشیمی مشتق از بافت چربی و مغز استخوان در مدت زمان ۴۸ ساعت دارای بیشترین تاثیر رشد و عصاره گیاه آویشن شیرازی نیز در غلظتg/ml ۱۰۰برای هر دو رده سلولصهای بنیادی مزانشیمی بافت چربی و مغز استخوان در مدت ۴۸ ساعت دارای بیشترین تاثیر رشد بود .همچنین نانوتیتانیوم از غلظت g/ml ۳۰۰در روز ۵دارای خاصیت توکسیک برای سلول های بنیادی مزانشیمی مغز استخوان بود و این درحالی است که خاصیت توکسیک آن حتی در غلظتصهای بالاتر از حد ایمن نیز بر روی سلولصهای بنیادی مزانشیمی مشتق از بافت چربی مشاهده نشد .عصاره آویشن شیرازی نیز در غلظت g/ml ۵۰۰برای سلولصهای بنیادی مشتق از بافت چربی و مغز استخوان به ترتیب در روز ۲ و ۱ دارای خاصیت توکسیک بود .نتایج حاصل از تکنیکPCR - Real timeافزایش بیان معنی دار ژن P۵۳ و کاهش معنی دار *) value<۰/۰۰۱)***:P value<۰/۰۱) (**: P value<۰/۰۵) P:بیان ژن Nanog را در سلولصهای بنیادی مزانشیمی مشتق از بافت چربی تیمار شده با نانوتیتانیوم در غلظت g/ml ۲۰۰و در سلولصهای بنیادی مغز استخوان تیمار شده با غلظت g/ml ۱۰۰پس از ۴۸ ساعت نشان داد . اگرچه که این غلظتصها در نتایج تست MTT ایمن بوده، که این خود نشانگر اثر منفی نانوتیتانیوم بر سلولصهای بنیادی و ورود آنصها به روند پیری حتی در غلظت های ایمن میصباشد .همچنین کاهش معنی دار بیان ژن P۵۳ و افزایش بیان ژن Nanog در سلولصهای بنیادی مزانشیمی مشتق از بافت چربی و مغز استخوان تیمار شده با عصاره آویشن شیرازی با غلظت بهینه g/ml۱۰۰پس از ۴۸ ساعت نشان دهنده تاثیر مثبت عصاره گیاه بر جلوگیری از روند پیری بود .نتیجه تاثیر نانوتیتانیوم بر چرخه سلولی با غلظت های بهینه ذکر شده بروی سلولصهای بنیادی نشان داد که این ماده موجب توقف رشد سلولصهای بنیادی و کاهش تعداد سلولصها در فاز S شده، حال آنکه عصاره آویشن شیرازی موجب افزایش شمار سلولصها در فاز S و کاهش آنصها در فاز G۰/G۱ میصشود .در نهایت نتایج حاصل از آزمایشات ما اثبات میکند که نانوتیتانیوم حتی در غلظتصهای ایمن به کار برده شده در موارد مختلف موجب تاثیر منفی بر رشد سلول ها و ورود آنصها به روند aging شده و سلولصهای بنیادی مغز استخوان نیز در این بین حساس تر میصباشند .از طرفی عصاره آویشن به دلیل خاصیت آنتی اکسیدانی خود از روند aging سلولصها جلوگیری کرده و میصتواند در موارد مختلف جایگزین مناسبی برای آنتی اکسیدانصهای صنعتی باشد
Text of Note
A phrase of "stem cell" is a cell-describing with high potential, which is transformed into different types of cells for make an initial tissues and repair of damaged tissues of the alive creature. The advancement of nanotechnology and the widespread use of nanoparticles in different of industries have led to a significant study of the destructive effects of nano-materials on creatures. Today, nano-titanium is used to produce all kinds of colors, food, cosmetics and hygiene products, and many other things. Also, Zataria multiflora Boissis is used as a flavor agent in a variety of foods in Iran and has different effects such as antiseptic, anesthetic, antispasmodic, antinociceptive, and antibacterial Methanolic extract of the leaves and flowers of Zataria multiflora also have antioxidant effects. The aim of this study was to evaluate the effects of methanolic extract of Zataria multiflora and nano titanium on aging process in two groups of bone marrow and stem cells derived from adipose tissue in rats. First, stem cells were extracted from bone marrow and mesenteric adipose, and stemness of stem cells that extracted, were confirmed by CD markers (CD45, CD90, CD105 and CD34) and flow cytometry. For this reason, the cells were treated for a while to prevent the process of differentiation. Subsequently, to evaluate cytotoxicity of each of these materials, the adipose tissue-mesenchymal stem cells were first introduced into nano-titanium with concentrations (g / ml, 50, 70, 130, 150, 170, 200, 280) for 1, 2 and 4 days, and extract of Zataria multiflora with concentrations (g / ml 10, 25, 50, 100, 130, 200, 300, 125 500) for 1, 2 and 3 days, and bone marrow stem cells was treated with nanotitanium (10, 50, 100, 200, 300, g / ml) for 1, 2, and 5 days, and Zataria multiflora extract with concentrations (10, 100, 200, 500, g / ml) for 1 and 2 days and tested by MTT assay. Beta-galactosidase staining was used to confirm the aging in the cells treated with the materials. The Real Time-PCR method was used to determine the expression of aging markers (P53 and Nanog). In the next test, the effect of nanotitanium with optimum concentrations of 50 g / ml and 100 on bone marrow and mesenchymal stem cells Fat and extracts of Zataria multiflora with 100g / ml concentration for both of stem cell groups on cell cycle were considered by flow cytometry. The results of the flow cytometry test with CD markers confirmed the stem cells of the extracted adipose tissue derived stem cells. In the MTT test, nanotitaium at 100 and 200 g / ml concentrations for adipose mesenchymal stem cells and bone marrow in the 48-hour period had the highest growth and extract Zataria multiflora in 100 g / ml For both mesenchymal stem cells, the adipose and bone marrow mesenchymal stem cells had the highest growth effect within 48 hours. Nanotitanium also has a toxic effect on bone marrow mesenchymal stem cells at a concentration of 300 g / ml on day 5, while its toxicity effects, even at the higher