NATIONAL BIBLIOGRAPHY NUMBER
Number
۱۶۸۱۷پ
LANGUAGE OF THE ITEM
.Language of Text, Soundtrack etc
per
TITLE AND STATEMENT OF RESPONSIBILITY
Title Proper
بیان ژن پروتئین پوششی ویروس کوتولگی بادام‌زمینی در باکتریEscherichia coli
First Statement of Responsibility
/حکیمه ایقانی مایان
.PUBLICATION, DISTRIBUTION, ETC
Name of Publisher, Distributor, etc.
: کشاورزی
Date of Publication, Distribution, etc.
، ۱۳۹۵
NOTES PERTAINING TO PUBLICATION, DISTRIBUTION, ETC.
Text of Note
چاپی
DISSERTATION (THESIS) NOTE
Dissertation or thesis details and type of degree
کارشناسی ارشد
Discipline of degree
بیماری‌شناسی گیاهی
Date of degree
۱۳۹۵/۱۱/۱۰
Body granting the degree
تبریز
SUMMARY OR ABSTRACT
Text of Note
ویروس کوتولگی بادام‌صزمینی Peanut stunt virus (PSV) عضو جنس Cucumovirus از خانواده Bromoviridae و پاتوژن مهم از نظر خسارت اقتصادی در حبوبات در سراسر جهان است .جنس Cucumovirus از خانواده Bromoviridae دارای سه عضو شامل، ویروس کوتولگی بادام‌صزمینی(PSV) ، ویروس موزاییک خیار (CMV) و ویروس بی‌صبذری گوجه‌صفرنگی (TAV) می‌صباشد PSV .با پراکنش جهانی وسیع‌صترین دامنه‌صی میزبانی را در بین ویروس‌صهای گیاهی داشته، به طوریکه در مزارع بادام‌صزمینی و یونجه کاری ایران نیز شیوع دارد و باعث کاهش راندمان۱۰ - ۵۰درصدی در تولید محصول می‌صشود .این ویروس دارای ژنوم RNA تک رشته‌ای مثبت سه قطعه‌ای و یک قطعه RNA زیرژنومی است RNA۳ .حالت دو سیسترونی داشته و پروتئین حرکتی و پروتئین پوششی را رمز می‌صکند ORF ۳a .بعنوان پروتئین حرکتی عمل می‌صکند ORF CP .که مشابه ORF ۲b از RNA۴ رمز می‌صشود، دارای وزن مولکولی ۲۴ کیلو دالتونی می باشد .پروتئین پوششی ویروس تاثیر بسزایی در چرخه بیماری‌صزایی و سرایت ویروس دارد .هدف از این مطالعه، بیان ژن پروتئین پوششی ویروس کوتولگی بادام‌صزمینی در باکتری Escherichia coli بدون نیاز به خالص‌صسازی ویروس بود .تولید پادتن نوترکیب، نیاز به خالص‌صسازی ویروس را که مستلزم وجود اولتراصسانتریفوژ است، مرتفع می-سازد .به منظور تولید پروتئین پوششی نوترکیب قاب خواندنی شماره‌صی چهار(RNA۴) ، RNA سوم ویروس که پروتئین پوششی را رمزگردانی می‌صکند، به کمک دو آغازگر اختصاصی از روی پلاسمید حاوی کلونER CP - PSVتوسط PCR تکثیر و به حامل همسانه‌صسازیT) - (pTG۱۹متصل و در باکتری E. Coli DH۵ کلون شدند .باکتری‌صهای تراریخت شده با پلاسمید نوترکیب روی محیط کشت LB حاوی آمپی‌صسیلینGal - Xو IPTG غربال شدند و پلاسمید از آنها به روش لیز آلکالینی استخراج گردید و پلاسمیدهای استخراج شده با آنزیم‌صهای BamHl و Sall با محل اثر در دو طرف محل اتصال دی‌صان‌صای خارجی برش داده شدند، قطعه‌صی مورد نظر پس از خالص‌صسازی به حامل بیان)pET۲۲b + (اتصال داده شد .پس از بیان ژن پروتئین پوششی PSV در باکتری E. coli BL۲۱(DE۳) اندازه‌صی وزن مولکولی پروتئین آن درPAGE - SDSدر حدود ۲۴ کیلو دالتون که منهای اسید آمینه‌صهای افزوده شده توسط حامل با اندازه‌صی پروتئین پوششی PSV مطابقت داشت
Text of Note
Peanut stunt virus (PSV) is a member of the genus Cucumovirus in the family Bromoviridae. PSV is an important pathogen of legominosae that causes economic losses all over the world. It is spread widely and infects trees, vegetable and weeds. In Iran, PSV was detected in peanut and alfalfa which had decreased the yield by 10-50 . Based on nucleotide sequence identity, serological properties, molecular hybridization and information on coat protein (CP) gene, PSV isolates are classified into four groups. The virus genome is positive sense ssRNA and tripartite with a subgenomic RNA4. RNA1 and RNA2 are packaged separately whereas RNA3 and sgRNA4 are packaged in the same particle. RNA1 and RNA2, respectively, code for 1a and 2a proteins which are required for the virus replication along with the host factors. RNA3 is dicistronic coding for the movement protein (MP) and CP from 5 to 3 direction. The CP is 24 kDa and essential in the virus spread and disease cycle. Aim of this study was to express PSV strain ER CP gene in Echerichia coli from the CP gene previously isolated from the infected plants by RT-PCR and cloned in a plasmid vector. The PSV-ER CP was amplified from the clone by a pair of the CP- specific primers in PCR. Then, the amplified fragment was ligated into pTG19-T cloning vector and transformed in Escherichia coli DH5. The transformed cells were selected on LB-medium containing AMP, X-Gal and IPTG. Plasmid was extraction by the alkaline lysis method and then subjected to digestion by BamHl and Sall. The released fragment was purified from the gel, ligated into pET22b(+) and transformed into expression host E. coli BL21(DE3). SDS-PAGE was carried out to prove the expression by revealing a 24 kDa bond. This demonstrated that the CP gene can be expressed in E. coli BL21(DE3)
PERSONAL NAME - PRIMARY RESPONSIBILITY
ایقانی مایان، حکیمه
PERSONAL NAME - SECONDARY RESPONSIBILITY
سخندان بشیر، نعمت، استاد راهنما
خاک ور، رضا، استاد مشاور
ELECTRONIC LOCATION AND ACCESS
Public note
سیاه و سفید
نمایه‌سازی قبلی
