عنوان

بررسی چندشکلی اگزون ‮‭۲‬ ژن‌های‮‭DRB۳ - BoLA‬و‮‭A-BoLA‬به روش‮‭SSCP- PCR‬و‮‭RFLP- PCR‬ و ارتباط آن‌ها با بیماری ورم پستان در گاوهای نژاد هلشتاین و سرابی

Number

‭۱۵۵۹۵پ‬

.Language of Text, Soundtrack etc

per

Title Proper

بررسی چندشکلی اگزون ‮‭۲‬ ژن‌های‮‭DRB۳ - BoLA‬و‮‭A-BoLA‬به روش‮‭SSCP- PCR‬و‮‭RFLP- PCR‬ و ارتباط آن‌ها با بیماری ورم پستان در گاوهای نژاد هلشتاین و سرابی

First Statement of Responsibility

/داود عشقی چهاربرج

Name of Publisher, Distributor, etc.

: دامپزشکی

Date of Publication, Distribution, etc.

، ‮‭۱۳۹۵‬

Name of Manufacturer

، راشدی

Text of Note

چاپی

Dissertation or thesis details and type of degree

کارشناسی ارشد

Discipline of degree

دکتری حرفه ای

Date of degree

‮‭۱۳۹۵/۰۶/۰۳‬

Body granting the degree

تبریز

Text of Note

ژن‌های مجتمع اصلی سازگاری نسجی ‮‭(MHC)‬ یک خوشه بزرگی از ژن‌های به‌هم‌پیوسته هستند که نقش مهمی در سیستم ایمنی بازی می‌کنند .در گاو این مکان ژنی ‮‭BoLA‬ نامیده می‌شود و واجد سه خوشه ژنی کلاس‌های یک، دو و سه است که روی بازوی کوتاه کروموزوم شماره ‮‭۲۳‬ قرار گرفته‌اند .از ژن‌های کلاس دو در گاوهای یک جفت ژن ‮‭DR (DRB۳, DRA)‬ و یک یا دو جفت ژن ‮‭DQ‬ در هر هاپلوتایپ بیان می‌شوند .آنتی‌ژن‌های کلاس یک تقریبا در سطح همه انواع سلول‌ها پیدا می‌شوند و در کل با پاسخ‌های سلول‌های ‮‭T‬ سیتوتوکسیک در ارتباط هستند .ارتباط مابین آللهای ‮‭BoLA‬ برای ژن‌های موجود در کلاس یک و دو با بیماری‌ها پیدا شده است .در این مطالعه، از تعداد ‮‭۳۰‬ رأس گاو هلشتاین مبتلا و ‮‭۳۰‬ رأس گاو هلشتاین سالم و همچنین ‮‭۳۰‬ رأس گاو بومی ایران) سرابی (خون‌گیری به عمل آمد .سپس ‮‭DNA‬ استخراج‌شده با پرایمرهای ویژه برای تکثیر اگزون ‮‭۲‬ ژن ‮‭DRB۳‬ و‮‭BoLA‬ - ‮‭A‬مورد استفاده قرار گرفت .محصول ‮‭PCR‬ برای ژن ‮‭DRB۳‬ و‮‭BoLA‬ - ‮‭A‬به ترتیب ‮‭۲۸۴‬ و ‮‭۲۷۶‬ جفت باز بود که بروی ژل آگارز ‮‭۵/۱‬ درصد مشاهده شد .سپس ‮‭۵‬ ماکرولیتر از محصول ‮‭PCR‬ برای واکنش هضم آنزیمی با آنزیم ‮‭Taq۱‬ و همچنین‮‭۴‬ - ‮‭۳‬ماکرولیتر از محصول ‮‭PCR‬ برای ‮‭SSCP‬ استفاده شد .محصولات حاصل از هردو تکنیک بروی ژل پلی اکریلامید ‮‭۷‬درصد برده شدند .در این تحقیق تنوع آلل های ناحیه‮‭DRB۳.۲ - BoLA‬و اگزون ‮‭۲‬ ژن‮‭BoLA‬ - ‮‭A‬با استفاده از روش‌های‮‭RFLP - PCR‬و‮‭SSCP - PCR‬در جمعیتی از گاوهای هلشتاین سالم و مبتلا به ورم پستان و هم‌چنین در گاوهای سرابی مورد بررسی و شناسایی قرار گرفته و فراوانی آلل ها و الگوهای مشاهده شده در هر کدام از جمعیت‌های مورد مطالعه تعیین شد.این اولین مطالعه بروی جایگاه ژنی‮‭BoLA‬ - ‮‭A‬در گاوهای سرابی است .برای ژن ‮‭DRB۳.۲‬ ،‮‭۱۷‬ نوع الگوی ژنوتیپی در گاوهای هلشتاین و ‮‭۱۷‬ نوع الگوی ژنوتیپی دیگر برای گاوهای سرابی مورد مطالعه مشاهده شد .نژاد سرابی الگوهای باندی متفاوتی را از نژاد هلشتاین نشان داد .بنابراین می‌توان گفت گاوهای سرابی آللها و فراوانی‌های متفاوت آللی را نسبت به هلشتاین دارا هستند‮‭. BoLA‬- ‮‭A‬در هر دو نژاد مورد مطالعه با هردو تکنیک ‮‭RFLP‬ و ‮‭SSCP‬ تک‌شکل بود و چندشکلی در این جایگاه مشاهده نشد .در کل نتایج این مطالعه بروی ژن) ‮‭DRB۳.۲‬ با هردو تکنیک (نشان داد که این جایگاه کاملا پلی مورف بوده و ارتباط معنی‌داری بین بعضی آللهای مشاهده شده در گاوهای سالم و مبتلا به ورم پستان مشاهده شد .این امر بیانگر آن است که این جایگاه می‌تواند به‌عنوان نشانگر ژنتیکی موفق در رابطه با شناسایی بیماری ورم پستان در هلشتاین های موجود در ایران عمل کند .همچنین نتایج هر دو تکنیک بکار رفته در این تحقیق در مورد گاوهای سرابی مورد مطالعه که تا حدودی مقاوم به بیماری ورم پستان هستند، کاملا آشکار ساخت که این نژاد از نظر توالی ژنومی در هر دو جایگاه ژنی مورد بررسی‮‭DRB۳.۲) -A, BoLA- (BoLA‬کاملا با نژاد هلشتاین مورد مطالعه تفاوت دارد و بنابراین می‌توان از این نژاد در شناسایی آللهای مقاوم به بیماری ورم پستان استفاده کرد

Text of Note

The major histocompatibility complex (MHC) is a large cluster of tightly linked genes that play an important role in the immune system. The MHC of cattle is known as bovine lymphocyte antigen (BoLA) located on chromosome 23 and their genes are organized into three distinct classes (class I, II, and III). Of the class II genes, cattle express one DR gene pair (DRA and DRB3) and one or two DQ gene pairs per haplotype. Class I antigens are found on the surface of nearly all cell types and are in general involved in the cytotoxic T-cell response. At present, only one class I locus (BoLA-A) is internationally accepted on the basis of serological testing. Associations between BoLA alleles and disease have also been identified for class I and class II genes. For this study, blood sampling was done from Holstein cattle (n=30 susceptible and n=30 resistance to mastitis) and a random sampling was done from Iranian native cattle (Sarabi; n=30).DNA was isolated and amplification of the BoLA-DRB3.2 and BoLA-A genes was achieved by PCR, using specific primers. PCR products were represented a 284 bp and 276 bp fragments on 4 agarose respectively for DRB3.2 and BoLA-A. Then, 5 l of PCR products were digested with restriction endonuclease Taq1 (fermatas, Canada). Also, 3-4 l of PCR products was used for SSCP. Restriction enzyme digested samples and SSCP prepared samples were electrophoresed in 10 Polyacrylamide gel electrophoresis (PAGE). In this study, we analyzed the polymorphism of exon 2 for BoLA-DRB3 and BoLA-A genes in Holstein and Iranian native cattle (Sarabi) using PCR-SSCP and PCR-RFLP, in order to identify alleles and pattern of the gene. This is the first study of the DNA consideration of the BoLA-A gene in Sarabi. The BoLA-DRB3 showed 17 genotypes pattern in Holstein and 17 different genotypes pattern in Sarabi cattle using SSCP. Sarabi breed has a different allele and allele frequency profile from Holstein. Therefore we can say that alleles and their frequency were different between Sarabi and Holstein breeds. BoLA-A was monomorphic in both studied breeds by either RFLP or SSCP techniques. In general, results of this study on DRB3.2 gene showed that the DRB3.2 is highly polymorphic and there is a significant relationship between some observed alleles with resistance or susceptible to mastitis. Therefore, this gene can be used as genetic marker for identification of mastitis disease in the cattle. Also, the results of both techniques on Sabari breed which is resistant to mastitis was revealed that this breed has different sequences in studied genes compared to Holstein breed. So this breed can be used for characterization and identification of alleles to mastitis resistant

عشقی چهاربرج، داود

فیروزامندی، معصومه، استاد راهنما

طلوعی کلیبر، محمد، استاد راهنما

اسدپور، رضا، استاد مشاور

Public note

سیاه و سفید

نمایه‌سازی قبلی