عنوان
پدید آورنده
موضوع
رده
کتابخانه
محل استقرار
NATIONAL BIBLIOGRAPHY NUMBER
Number
TLpq2465334259
LANGUAGE OF THE ITEM
.Language of Text, Soundtrack etc
tur
TITLE AND STATEMENT OF RESPONSIBILITY
Title Proper
Haloarcula hispanica'Ya Ait Proteaz Enzimlerinin Escherichia coli'De Rekombinant Olarak üretilmesi Ve Analizi
General Material Designation
[Thesis]
First Statement of Responsibility
Güneş, Ayşenur
Subsequent Statement of Responsibility
Turan, Kadir
.PUBLICATION, DISTRIBUTION, ETC
Name of Publisher, Distributor, etc.
Marmara Universitesi (Turkey)
Date of Publication, Distribution, etc.
2019
PHYSICAL DESCRIPTION
Specific Material Designation and Extent of Item
170
DISSERTATION (THESIS) NOTE
Dissertation or thesis details and type of degree
Master's
Body granting the degree
Marmara Universitesi (Turkey)
Text preceding or following the note
2019
SUMMARY OR ABSTRACT
Text of Note
Amaç: Farklı organizmalardan elde edilen proteolitik enzimler endüstrinin değişik alanlarında yaygın olarak kullanılmaktadır. Bu tez çalışmasında, ekstremofil özellik gösteren ve çoğalmak için özel koşullar gerektiren H. hispanica'ya ait proteaz genlerini, üretilmesi daha kolay ve ucuz olan Escherichia coli hücrelerine aktarmak, bu hücrelerde proteaz enzimlerini rekombinant olarak üretmek ve proteolitik aktivitelerini analiz etmek amaçlandı. Gereç ve Yöntem: H. hispanica genomunda proteaz ve serin proteaz geni okuma çerçevesi olarak tanımlanan DNA bölgeleri PZR tekniği ile çoğaltıldı ve E. coli hücreleri için geliştirilen, farklı kontrol bölgelerine sahip plazmit vektörlere (pET-14b, pBluescript II SK+ ve pAK-Taq) klonlandı. Klonlanan genlerin doğrulukları DNA dizi analizleri ile saptandı. Rekombinant proteaz enzimlerinin E. coli hücrelerinde sentezi SDS-PAGE teknikleri ile analiz edildi. Enzim aktiviteleri, hücrelerin milk-agar besiyerinde oluşturdukları üreme zonlarına ve hücrelerden hazırlanan lizatların BSA'yı ve/veya azokazein substratı hidroliz etme özelliklerine bakılarak değerlendirildi. Bulgular ve Sonuç: Farklı promotör dizileri kontrolünde klonlanan H. hispanica proteaz genlerinin nukleotit dizilerinin doğruluğu DNA dizi analizleri ile ortaya kondu. H. hispanica proteaz geninin denenen farklı E. coli suşlarında istenilen düzeylerde ekspresyon yapmadığı görüldü. Buna karşın serin proteaz geninin T7 bakteriyofaj promotörü kontrolünde, E. coli BL21 hücrelerinde, diğer hücresel proteinleri ile karşılaştırıldığında yüksek düzeylerde ekspresyon yaptığı saptandı. Bununla birlikte rekombinant serin proteazın hücrelerde inaktif inklüzyon cisimleri halinde biriktiği belirlendi. Rekombinant serin proteazın çözünür forma dönüştürülmesinde kısmen başarı sağlansa da, istenilen düzeylerde enzim aktivitesi saptanamadı. E. coli hücrelerinde etkin olarak sentezlenen H. hispanica serin proteaz enziminin tekrar aktif forma katlanmasına yönelik çalışmalar sürdürülmektedir.
TOPICAL NAME USED AS SUBJECT
Cellular biology
PERSONAL NAME - PRIMARY RESPONSIBILITY
Güneş, Ayşenur
Turan, Kadir
ELECTRONIC LOCATION AND ACCESS
Electronic name
مطالعه متن کتاب p
[Thesis]
276903
a
Y
