بررسی اثر اگزوزوم های استخراج شده از مایع منی هترولوگ، بر کیفیت اسپرم های منجمد - ذوب شده در مردان Normozoospermia
General Material Designation
[پایان نامه]
First Statement of Responsibility
فروغ مهدوی نژاد
.PUBLICATION, DISTRIBUTION, ETC
Name of Publisher, Distributor, etc.
دانشگاه علوم پزشکی تهران، دانشکده پزشکی
Date of Publication, Distribution, etc.
۱۴۰۱
PHYSICAL DESCRIPTION
Specific Material Designation and Extent of Item
۱۲۰ص.
Accompanying Material
سی دی
DISSERTATION (THESIS) NOTE
Dissertation or thesis details and type of degree
دکتری تخصصی(PHD)
Discipline of degree
بیولوژی تولیدمثل
SUMMARY OR ABSTRACT
Text of Note
مقدمه و هدف: انجماد اسپرم موثرترین روش نگهداری طولانی مدت اسپرم است. علیرغم فواید انجماد در حفظ گامت ها، روند انجماد اسپرم همواره سبب آسیب هایی به تحرک، زنده¬مانی، آسیب به DNA اسپرم به دلیل سطح بالای استرس اکسیداتیو و در نهایت توانایی باروری آن می گردد. برای به حداقل رساندن این آسیب ما باید بینش خود را در مورد عوامل محافظت کننده از اسپرم طی فریز بالا ببریم. اگزوزوم¬های استخراج شده از مایع منی فواید بسیاری از جمله افزایش تحرک، خاصیت آنتی¬اکسیدانی، کاهش گونه¬های فعال اکسیژن (ROS)، جلوگیری از ظرفیت¬پذیری زودرس و انواعی از فاکتورهای سیگنالینگ از جمله WNT را دارند. همچنین حضور فاکتور HSP70 و HSP90 که آنتی¬اکسیدان¬های مهمی برای محافظت از اسپرم طی انجماد محسوب می¬شوند نیز گزارش شده است. بنابراین، به نظر می¬آید اگزوزوم¬های مایع منی کاندید مناسبی جهت استفاده برای بهبود کیفیت اسپرم باشند. مواد و روش¬ کار: در این مطالعه، اگزوزوم¬های جدا شده از نمونه¬های مایع منی نرموزواسپرمی با روش التراسانتریفیوژ سریالی استخراج و با استفاده از میکروسکوپ الکترونی نگاره، پراکندگی نور پویا و وسترن بلات تایید شدند. جذب اگزوزوم¬ها توسط اسپرم با استفاده از رنگ آمیزی DiI تشخیص داده شد. اثرات اگزوزوم¬ها در طول انجماد با تعیین تحرک اسپرم بعد از ذوب، مورفولوژی، زنده¬مانی، پراکسیداسیون لیپیدها، آسیب DNA، پتانسیل غشای میتوکندری، ظرفیت آنتی اکسیدانی کل، میزان آپوپتوز و تولید ROS مورد بررسی قرار گرفت. یافته¬ها: اندازه و مورفولوژی اگزوزوم¬ها نشان داد که آن¬ها دارای مورفولوژی گرد هستند و حدود 70٪ از اگزوزوم¬ها دارای اندازه بین 43 تا 144 نانومتر می-باشند و هر سه مارکر اختصاصی اگزوزوم شامل CD9، CD81، و CD63 را بیان می¬کنند. نتایج پس از ذوب شدن نشان داد که در حضور اگزوزوم، تحرک اسپرم به طور معناداری افزایش یافته است (P = 0.007) که با افزایش سطح پتانسیل غشای میتوکندری (P = 0.001) سازگار است. سطوح ROS به میزان معناداری کاهش یافت (P = 0.001)، و در نتیجه، کاهش آسیب DNA (P = 0.001) و افزایش زنده¬مانی (P < 0.001) و مورفولوژی (P < 0.001) حاصل شد. ظرفیت آنتی اکسیدانی کل نیز به طور معناداری بهبود یافت (P = 0.001)، در حالی که سطح پراکسیداسیون لیپیدها (P = 0.62) و میزان آپوپتوز (P = 1.000) بدون تغییر باقی ماند. نتیجه¬گیری: یافته¬های ما نشان داد که اگزوزوم های مایع منی می توانند اسپرم را از آسیب¬های ناشی از فریز محافظت کنند.