بررسی اثرات تحریکی و مهاری micro RNA 30 در فرآیند خود نوزایی و تمایز سلول های بنیادی اسپرماتوگونی موش نوزاد
General Material Designation
[پایان نامه]
First Statement of Responsibility
مریم خانه زاد
.PUBLICATION, DISTRIBUTION, ETC
Name of Publisher, Distributor, etc.
دانشگاه علوم پزشکی تهران، دانشکده پزشکی
Date of Publication, Distribution, etc.
۱۳۹۹
PHYSICAL DESCRIPTION
Specific Material Designation and Extent of Item
۸۹ص
Other Physical Details
جدول،نمودار
Accompanying Material
سی دی
DISSERTATION (THESIS) NOTE
Dissertation or thesis details and type of degree
دکتری تخصصی(PHD)
Discipline of degree
علوم تشریح
Text preceding or following the note
۲۰
SUMMARY OR ABSTRACT
Text of Note
اسپرمزایی فرآیندی پیچیده و بسیار سازمانیافته است که به تعادل بین تکثیر و تمایز سلولهای بنیادی اسپرماتوگونی (SSCs) نیازمند است. تنظیم تعادل بین خودنوزایی و تمایز SSCs نیازمند برنامه دقیقی از بیان ژنهاست. مطالعات متعددی گزارش کردهاند که miRNAs به عنوان یک عامل حیاتی میتوانند بیان ژنها و تعیین سرنوشت SSCs در فرآیند اسپرمزایی را تنظیم کنند. با این وجود، عملکرد و مکانیزم مولکولی miRNAsمختلف در تعیین سرنوشت SSCs به صورت ناشناخته باقي مانده است. جهت فراهم کردن ابزاری مناسب و کاربردی در تشخیص مولکولی و درمان انواع بیماریها و ناباروری، نقش اثرات تحريكي و مهاري microRNA-30 بر تنظیم خودنوزایی و تمایز سلولهای بنیادی اسپرماتوگونی موش نوزاد مورد بررسی قرار گرفت.روش کار: سلولهای بنیادی اسپرماتوگونی موشهای نوزاد (6-3 روزه) بعد از جداسازی با روش Differential plating خالص شدند. درصد خلوص سلولها توسط فلوسایتومتری با دو نشانگر PLZF و GFRa1سنجیده شد. به دنبال کشت و رسیدن سلولها به تراکم confeluency)) مناسب، ترانسفکت miRNA-30 (100نانومولار) انجام شد. بیان ژنهای (ID4, PLZF) و ژن c-Kit 48 ساعت بعد از ترانسفکشن توسط تکنیک real time PCR مورد ارزیابی قرار گرفتند. بیان پروتئین PTEN به عنوان هدف بالقوه برای miRNA-30 و همچنین پروتئین FoxO توسط وسترن بلات اندازهگیری شد. در نهایت بعد از گذشت یک هفته تعداد و قطر متوسط کلونیها مورد بررسی قرار گرفتند.یافتهها: نتایج حاصل از فلوسایتومتری به ترتیب خلوص 23/96 درصد و 32/98 درصد برای نشانگر GFRa1 و PLZF را نشان داد. ترانسفکت miRNA-30mimic به سلولها سبب افزایش معنادار بیان ژنهای تمایزنیافته (ID4, PLZF) و در مقابل کاهش قابل توجه بیان ژن c-Kit شد. در حالی که در سلولهای ترانسفکت شده با miRNA-30 inhibitor کاهش قابل ملاحظه ژنهای ID4, PLZF و افزایش ژن c-Kit مشاهده شد. در مورد پروتئینهای FoxO و PTEN نتایج وسترن بلات حاکی از کاهش و افزایش معنادار به ترتیب در گروه mimic و inhibitor بود. تعداد و قطر متوسط کلونیها نیز در گروه mimic نسبت به سایرگروهها افزایش قابل توجهی داشت.نتیجهگیری: بر اساس نتایج به دست آمده میتوان گفت که افزایش بیان miRNA-30 در سلولهای بنیادی اسپرماتوگونی سبب تنظیم و پیشبرد فرآیند خودنوزایی و کاهش بیان آن سبب مهار خودنوزایی و افزایش تمایز SSCs میشود. به عبارت دیگر احتمالا miRNA-30 از طریق PTENبه عنوان یکی از اهداف بالقوه خود، تعادل بین خودنوزایی و تمایز SSCs را تنظیم میکند.