تعیین الگوی متیلاسیون در ژن ها و ناحیه کنترل ایمپرینتینگ SNURF-SNRPN و UBE3A در اسپرم انسان پس از انجماد
General Material Designation
[پایان نامه]
First Statement of Responsibility
زهرا خسروی زاده
.PUBLICATION, DISTRIBUTION, ETC
Name of Publisher, Distributor, etc.
دانشگاه علوم پزشکی تهران، دانشکده پزشکی
Date of Publication, Distribution, etc.
۱۳۹۹
PHYSICAL DESCRIPTION
Specific Material Designation and Extent of Item
۲۹ص
Other Physical Details
جدول،نمودار
Accompanying Material
سی دی
DISSERTATION (THESIS) NOTE
Dissertation or thesis details and type of degree
دکتری تخصصی(PHD)
Discipline of degree
بیولوژی تولیدمثل
Text preceding or following the note
۲۰
SUMMARY OR ABSTRACT
Text of Note
انجماد اسپرم روشی است که به طور معمول در کلینیک های باروری به ویژه در بیماران مبتلا به سرطان قبل از آغاز اثرات گنادوتوکسیک شیمی درمانی و رادیوتراپی استفاده می شود. علیرغم وجود شواهدی مبنی بر تولید reactive oxygen species (ROS) و فراگمنتاسیون DNA در هنگام انجماد اسپرم، اطلاعات کمی در مورد اثر انجماد بر الگوهای متیلاسیون ژن های دارای imprint و نواحی کنترل imprinting وجود دارد. مواد و روش کار: در این مطالعه اثرات انجماد-ذوب بر متیلاسیون DNA در ناحیه های پروموتوری ژن های SNURF-SNRPN و UBE3A، PWS-ICR و AS-ICR و ارتباط بین فراگمنتاسیون DNA و تغییرات الگوهای متیلاسیون DNA را بررسی کردیم. نمونه های منی از 10 مرد سالم با مایع انزال طبیعی در مرکز ناباروری بیمارستان یاس تهران جمع آوری شد و هر نمونه به چهار قسمت مساوی تقسیم شد: تازه، تیمار با نگهدارنده انجماد (تیمار شده با نگهدارنده انجماد)، انجماد (تیمار شده با نگهدارنده انجماد و ذوب کردن پس از یک ماه انجماد) و تیمار با هیدروژن پراکسید ( تیمار شده با H2O2 4 mM پس از انجماد-ذوب). میزان تولید ROS و فراگمنتاسیون DNA به وسیله flow cytometry به ترتیب با استفاده از رنگ آمیزی DCFH-DA و تست TUNEL اندازه گیری شد. میزان متیلاسیون DNA به وسیله تکنیک quantitative Methylation-Specific PCR ارزیابی شد.یافته ها: DCF MFI در گروه انجماد نسبت به گروه های تازه (015/0=P) و تیمار با نگهدارنده انجماد (006/0=P) افزایش معناداری داشت. درصد اسپرماتوزوآی TUNEL مثبت در گروه انجماد-ذوب در مقایسه با گروه تازه افزایش معناداری داشت (013/0=P). درصد اسپرماتوزوآی TUNEL مثبت در گروه تیمار با نگهدارنده انجماد تفاوت معناداری نسبت به گروه تازه نداشت. مواجهه با نگهدارنده انجماد یا انجماد اسپرماتوزوآ هیچ کدام الگوی متیلاسیون DNA نواحی ژنی انتخاب شده را تحت تأثیر قرار نداد. اگر چه فرایند انجماد-ذوب به طور معناداری میزان ROS و فراگمنتاسیون DNA را افزایش داد، میزان متیلاسیون هیچ تغییر معناداری نشان نداد و فراگمنتاسیون DNA فقط با متیلاسیون DNA در AS-ICR ارتباط داشت.نتیجه گیری: بر اساس نتایج حاصل از مطالعه حاضر، انجماد-ذوب اسپرماتوزوآ می تواند منجر به تولید ROS و فراگمنتاسیون DNA شود، اما این تکنیک هیچ اثر مضر قابل توجهی بر وضعیت متیلاسیون DNA نواحی ژنی انتخاب شده نداشت. به نظر می رسد استفاده کلینیکی انجماد-ذوب اسپرم در درمان های باروری در مورد متیلاسیون DNA بی خطر است.