عنوان
پدید آورنده
موضوع
رده
کتابخانه
محل استقرار
NATIONAL BIBLIOGRAPHY NUMBER
Number
۹۴۹۷۸پ
LANGUAGE OF THE ITEM
.Language of Text, Soundtrack etc
فارسی
Language of Original Work
فارسی
TITLE AND STATEMENT OF RESPONSIBILITY
Title Proper
مقایسه روش های تکثیر سلولی و انتقال ژن برای سلول T به منظور تولید سلول T کار آمد حاوی رسپتور کایمریک
General Material Designation
[پایان نامه]
First Statement of Responsibility
علیرضا رجب زاده
.PUBLICATION, DISTRIBUTION, ETC
Name of Publisher, Distributor, etc.
دانشگاه علوم پزشکی تهران، دانشکده پزشکی
Date of Publication, Distribution, etc.
۱۳۹۸
PHYSICAL DESCRIPTION
Specific Material Designation and Extent of Item
۱۵۸ص.
Other Physical Details
جدول،نمودار
Accompanying Material
سی دی
DISSERTATION (THESIS) NOTE
Dissertation or thesis details and type of degree
دکتری تخصصی(PHD)
Discipline of degree
علوم سلولی کاربردی
Text preceding or following the note
۲۰
SUMMARY OR ABSTRACT
Text of Note
سلول درمانی با سلول های ایمنی یک از امیدبخش ترین روش¬های درمانی حال حاضر محسوب می-شود به طوریکه در سال¬های اخیر درمان¬های مبتنی بر chimeric antigen receptor (CAR) T cell موفقیت¬های چشمگیری در درمان سرطان داشته¬اند. با وجود موفقیت¬های قابل توجه در درمان سرطان¬های خونی هنوز استفاده از CAR T cell therapy در درمان سرطان¬های جامد با چالش همراه است. ساختار مولکولی CAR از یک دومین شناسایی کننده آنتی¬ژن و به دنبال آن دومین-های سیگنالینگ تشکیل شده است. اغلب مطالعاتی که تاکنون انجام شده از scFvهای با منشا موشی به عنوان بخش شناسایی کننده آنتی¬ژن استفاده نموده¬اند که در چندین کارآزمایی بالینی منجر به حذف سلول¬های CAR T از بدن بیمار گردیده است. نانوبادی¬ها (VHH) آنتی¬بادی¬های تک¬دومین شتری بوده که به دلیل اندازه کوچک و همولوژی بالا با VH انسانی بسیار مورد توجه قرار گرفته¬اند. از اینرو در این مطالعه با هدف بهینه سازی روش¬ها و ساخت سلول انسانیِ CAR T کارآمد بر پایه VHH، سعی شده است سازه ژنی CAR حاوی VHH اختصاصی علیه آنتی¬ژن MUC1 طراحی و ساخته شده سپس مراحل مرتبط با ساخت وکتورهای ویروسی حاوی CAR و انتقال ژن CAR به سلول¬های اولیه T انسانی بهینه شوند.مواد و روش کار: در این مطالعه یک سازه نسل دومِ CAR جدید حاوی بخش شناسایی کننده آنتی¬ژن بر پایه VHH علیه MUC1 طراحی و ساخته شد. سپس پلاسمید نوترکیب حاوی سازه ژنی CAR ساخته و جهت بهینه¬سازیِ تولید ویروس با شرایط مختلف به سلول¬های Lenti-X 293T ترانسفکت شد. ترانسداکشن سلول¬های اولیه T انسانی نیز با وکتورهای ویروسی نوترکیب حاوی قطعه ژنی anti-MUC1 CAR بهینه سازی شد و سپس صحت و میزان بیان anti-MUC1 CAR بر سطح سلول¬های T بررسی شد. در نهایت نیز عملکرد سلول¬های مهندسی شده anti-MUC1 CAR T cell از نظر اختصاصیت در شناسایی سلول¬های سرطانی دارای MUC1، فعالیت توکسیستی آن¬ها و ترشح سایتوکاین¬های تحریکی ارزیابی شدند.یافته¬ها: نتایج حاصل از توالی¬یابی، آزمون هضم آنزیمی و colony-PCR، صحت توالی و انتقال قطعات ژنی anti-MUC1 CAR را تایید کرد. همچنین نتایج حاصل از بهینه سازی ترانسفکشن وکتور pLJM1 نشان داد بهترین شرایط برای انتقال این وکتور به سلول¬های Lenti-X 293T استفاده از روش PEI و با شرایط 6 ساعت انک.باسیون در نسبت 1:1 PEI:DNA است. نتایج ترانسداکشن سلول¬های T نشان داد که در گروه spinoculation+retronectin 452/4±19/63 درصد از سلول-های T گیرنده کایمریک را بیان کرده بودند در صورتیکه این میزان در گروه¬¬های spinoculation+polyberene، رترونکتین، پلی¬برن و spinoculation به ترتیب 442/4±6/34 درصد، 852/1±37/10 درصد، 795/0±23/10 درصد و 558/1±11/21 درصد بودند. هم¬کشتی سلول¬های مهندسی شده با سلول¬های رده سرطانی MUC1مثبت نشان داد که سلول¬های ترانسدیوس شده فعالیت توکسیستی (نرخ زند¬مانی) معنی¬داری (9.19±24.9 و 5.24±22.73 درصد) نسبت به هم¬کشتی این سلول¬ها با سلول¬های رده سرطانی MUC1 منفی (22.48±69.1 درصد) و یا سلو¬های ترانسدیوس نشده (3.18±85.01 درصد و 7.81±86.9 درصد) داشت. به علاوه در هم¬کشتی این سلول¬های مهندسی شده با سلول¬های سرطانیِ MUC1مثبت میزان ترشح سایتوکاین¬های تحریکیِ IL-2 (pg/mL 81.32±1388)، TNF-α (pg/mL 4.24±503) و IFN-ꝩ (pg/mL 5.65±253) نسبت به هم¬کشتی سلول¬های T دستورزی نشده با این سلول¬ها افزایش معنی داری را نشان داد. نتایج تکثیر سلول¬های T نیز نشان داد که این سلول¬ها در شرایط IU 100 IL-2 و نسبت (Cell:Bead) 1:3 بیدهای anti-CD23/CD28 منجر به افزایش 28 برابری سلول¬ها شده که نسبت به سایر گروه¬ها تفاوت معنی داری داشت.نتیجه¬گیری: با توجه به نتایج بدست آمده طراحی و ساخت سازه VHH-anti-MUC1 CAR، بهینه¬سازی تولید ویروس¬های نوترکیب حاوی این سازه و انتقال ژن به داخل سلول¬های اولیه T انسانی به خوبی انجام شد و با توجه به کارآیی موثر سازه CAR بر پایه anti-MUC1-VHH و سلول¬های T مهندسی شده حاوی آن، به نظر می¬رسد این سازه بتواند جایگزین بهتری برای CARهای بر پایه scFv در مطالعات حیوانی و کارآزمایی¬های بالینی باشد.
TOPICAL NAME USED AS SUBJECT
گیرنده آنتی ژن کایمریک (CAR)
سلول درمانی با سلول های ایمنی
نانوبادی (VHH)
ترانسداکشن
PERSONAL NAME - PRIMARY RESPONSIBILITY
Relator Code
، پدیدآور
رجب زاده، علیرضا
PERSONAL NAME - SECONDARY RESPONSIBILITY
Relator Code
، استاد راهنما
Relator Code
، استاد راهنما
Relator Code
، استاد مشاور
حمیدیه، امیر علی
رهبری زاده، فاطمه
کبیر سلطانی، مریم
CORPORATE BODY NAME - SECONDARY RESPONSIBILITY
Entry Element
دانشگاه علوم پزشکی تهران، دانشکده پزشکی
ORIGINATING SOURCE
Country
ایران
Date of Transaction
20230314
LOCATION AND CALL NUMBER
Call Number
۱۸۸۴ف
DATA NOT CONVERTED FROM SOURCE FORMAT
Tag of the Source Format Field
دانشگاه علوم پزشکی تهران، کتابخانه دانشکده پزشکی
p
TF
92029
a
Y
