بررسی تمایز سلولهای اسپرماتوگونی انسان در سیستم کشت سه بعدی آگار نرم
General Material Designation
[پایان نامه]
First Statement of Responsibility
کیکاوس غلامی
.PUBLICATION, DISTRIBUTION, ETC
Name of Publisher, Distributor, etc.
دانشگاه علوم پزشکی تهران، دانشکده پزشکی
Date of Publication, Distribution, etc.
۱۳۹۷
PHYSICAL DESCRIPTION
Specific Material Designation and Extent of Item
۱۰۰ص.
Other Physical Details
جدول نمودار
Accompanying Material
سی دی
DISSERTATION (THESIS) NOTE
Dissertation or thesis details and type of degree
دکتری تخصصی(PHD)
Discipline of degree
بیولوژی تولید مثل
SUMMARY OR ABSTRACT
Text of Note
مقدمه و هدف: اسپرماتوژنز فرآیند سازمانیافته و مداومی است که طی آن مراحل متعدد تکثیر و تمایز سلولهای بنیادی اسپرماتوگونی SSC:( Spermatogonial Stem Cell) موجب تولید تعداد نامحدود اسپرماتوزوآ در سراسر زندگی فرد می شود. از این رو حجم بالای این سلولها همواره در بیضه فرد مذکر مورد نیاز است. این فرایند در بیماران سرطانی تحت درمان با رادیوتراپی و شیمیدرمانی ممکن است مختل شده و منجر به ناباروری این افراد پس از روند درمان گردد. بر همین اساس تولید اسپرم از سلولهای اسپرماتوگونی در شرایط برون تن می تواند گزینه مناسبی برای این بیماران باشد . مشخص شده که کشتهای سلولی بهینه شده می تواند یک ساختار فضایی سهبعدی شبیه اپیتلیوم سمینیفروز را فراهم کند و اخیرا گروهی از محققین موفق شدند با استفاده از سیستمهای کشت سهبعدی بر پایه آگار یا متیل سلولز(Soft-Agar-Culture-System (SACS)) از تمایز اسپرماتوگونیهای موشی ، اسپرماتیدهای طویل شده و بالغ به دست بیاورند. از این رو به نظر می رسد که ،تولید برونتنی اسپرم از اسپرماتوگونیها با استفاده از محیطهای سه بعدی قابل انجام است. در این محیط سهبعدی کمپلکسی از ماتریکس، سلولهای سوماتیک و سلولهای جنسی در محیط برون تن ایجاد میشود که برای اسپرماتوژنز حیاتی است. هدف از این مطالعه بررسی کاربرد SACS برای حمایت از اسپرماتوژنز انسانی است.روش کار: بیضه از بیماران مرگ مغزی در مرکز پیوند اعضاء بیمارستان سینا براساس مجوز کمیته اخلاق پزشکی دانشگاه و رضایت خانواده بدست آمد . سوسپانسیون سلولی حاصل از دو مرحله هضم آنزیمی بافت بیضه به منظور ازدیاد سلولهای اسپرماتوگونی بدون هیچ گونه تخلیصسازی در یک محیط تکثیری به مدت سه تا چهار هفته کشت دادهشد و پس از این دوره سلولهای اسپرماتوگونی به منظور بررسی توان تمایز آنها در محیط سه بعدی آگار و دوبعدی به مدت 4 هفته کشت داده شدند. پس از آن درصد زنده مانی، تعداد و قطر متوسط کلونیها در انتهای هفته دوم و چهارم و میزان بیان ژنهای تمایزنیافته و ژنهای تمایزیافته با Real Time PCR و ایمونوسیتوشیمی ارزیابی شدند. یافتهها: میزان زندهمانی سلولهای اسپرماتوگونی همکشتی دادهشده با سلولهای سرتولی در لایه بالایی آگار نرم به طور معنیداری بیشتر از گروه سلولهای اسرماتوگونی به تنهایی بود. تعداد و قطر کلونیها به طور معنیداری در گروه سه بعدی آگار حاوی سلولهای سرتولی بیشتر از گروه دوبعدی و سهبعدی آگار حاوی فقط اسپرماتوگونی بود. بعد از چهار هفته از کشت در یک محیط تمایزی،میزان بیان ژنها و پروتئینهای تمایزی در گروه سهبعدی هم کشتیشده با سلولهای سرتولی بیشتر بود. نتیجه گیری: نتایج ما نشان داد که SACS میتواند به عنوان یک روشی برای بلوغ سلولهای جنسی قبل از میوز تا مرحله بعد از میوز استفاده شود .