بررسی تاثیر رتینوئیک اسید و پروتئین تمایزی استخوان- 4 (BMP-4) بر تمایز سلولهای بنیادی جدا شده از تخمدان موش NMRI به سمت سلولهای شبه تخمکی
General Material Designation
[پایان نامه]
First Statement of Responsibility
معصومه مجیدی ذوالبین
.PUBLICATION, DISTRIBUTION, ETC
Name of Publisher, Distributor, etc.
دانشگاه علوم پزشکی تهران، دانشکده پزشکی
Date of Publication, Distribution, etc.
1396
PHYSICAL DESCRIPTION
Specific Material Designation and Extent of Item
۸۳ص.
Other Physical Details
جدول نمودار
Accompanying Material
سی دی
DISSERTATION (THESIS) NOTE
Dissertation or thesis details and type of degree
دکتری تخصصی(PHD)
Discipline of degree
علوم تشریحی
SUMMARY OR ABSTRACT
Text of Note
مطالعات انجام شده در سالهای اخیر در زمینه تمایز سلولهای بنیادی به سلولهای زایا نگرش دانشمندان را به مبحث باروری و ناباروری تغییر داده است. تولید داخل آزمایشگاهی سلولهای زایا نه تنها میتواند روش درمانی نوینی برای زوجین نابارور ارائه دهد بلکه گام مهمی در درک بهتر نحوه تکامل سلولهای زایای جنس مذکر و مؤنث نیز میباشد. انواع و قدرت تمایزی سلولهای بنیادی موجود در تخمدان پستانداران تا کنون در طیف وسیع قابل شناسایی نبوده است، بویژه با توجه به گزارشات در خصوص پروفایل بیان ژنی سلولهای زایا اطلاعات محکمی دردسترس نیست.هدف: لذا هدف از مطالعه حاضر بر آن بود که با تمايز سلولهاي بنيادي جدا شده از تخمدان توان تمایزی آنها به سمت سلولهای شبه تخمکی تحت تاثیر فاکتورهای تمایزی BMP-4 و RA بررسی کنیم تا شايد بتوان با ادامه تحقيقات به توليد داخل آزمايشگاهي سلولهاي جنسي تکامل يافتهتر دست يافت. مواد و روش ها :هموژن کامل بافت تخمدان موش به روش FACS با استفاده از نشانگرهای Sca-1 , SSEA-1 از تخمدان جدا شدند. سلولهای single- and double-positiveدارای قطری حدود 3-10 µm بودند. ابتدا و پس از کشت و تکثیر نیز جهت تآئید بیان نشانگرهای بنیادی Sca-1 , Nanog از تکنیک RT-PCR استفاده گردید. جهت ارزيابي چند توان بودن اين سلولها با استفاده از کیت تمايزي به سه ردهء Osteoblast, Chondrocyte ،Adipocyte تمايز داده و با رنگ آميزي اختصاصی ایمونوسیتوشیمی و Safronin O و Oil Red-O تمايز آنها بررسی شد. سپس اين سلّولها در محيطهای القايي حاوی BMP4 و RA و BMP4 + RA(به مدت یک و دو هفته)، به سلولهای زایا تمایز داده شدند. سپس رنگ آمیزی ایمونوفلوروسنس برای بررسی پروتئینهای سلولهای زایا ) DAZL, DDX4, Fragilis) و real time PCR جهت برسی بیان نشانگرهای رده سلّولهای زایا RXR, Figla, PRDM9, GDF-9, NOBOX و(SCP3 انجام شد. در نهایت نیز بیان AMH در سلولهای جدا شده با تکنیک الایزا بررسی گردید.نتایج: RA محرک قوی است که سلولهای تخلیص شده را به سمت بیان نشانگرهای تمایزی و تکامل به سمت سلولهایی که از لحاظ مورفولوژیک شبیه اووسیت بودند هدایت می کند. تیمار BMP4 به تنهایی به طور معناداری بیان آنتی مولرین هورمون ((AMH مارکر سلولهای گرانولوزا را از خود نشان داد. این سلولهای جداسازی شده توانایی تمایزی به سه رده مزانشیمی را از خود نشان دادند.نتیجه گیری نهایی: یافتههای ما نشان داد که جداسازی اختصاصی سلولهای بنیادی طبق این پروتکل باعث شناسایی جمعیتی یکپارچه از سلولهایی میشود که با تیمار هایی میتوانند بیان پایه ای از ژنهای سلولهای زایا را داشته باشند که در تیمار به RA به تنهایی به سلولهای زایا تمایز می یاند و با BMP4 قدرت ترشح AMH که بخشی از پروفایل سلولهای گرانولوزاست را مییابند و یا اینکه با تیمارهای اختصاصی مزانشیمی به سه رده مزانشیمی تمایز یابند.