عنوان
پدید آورنده
موضوع
رده
کتابخانه
محل استقرار
NATIONAL BIBLIOGRAPHY NUMBER
Number
۹۶۸۶۱پ
LANGUAGE OF THE ITEM
.Language of Text, Soundtrack etc
فارسی
TITLE AND STATEMENT OF RESPONSIBILITY
Title Proper
تهیه آنتی بادی منوکلونال علیه پروتئین اینهیبین A
General Material Designation
[پایان نامه]
First Statement of Responsibility
صدیقه کولیوند
.PUBLICATION, DISTRIBUTION, ETC
Name of Publisher, Distributor, etc.
دانشگاه علوم پزشکی تهران، دانشکده پزشکی
PHYSICAL DESCRIPTION
Specific Material Designation and Extent of Item
۱۳۷ص
Other Physical Details
جدول و نمودار
Accompanying Material
سی دی
DISSERTATION (THESIS) NOTE
Dissertation or thesis details and type of degree
دکتری تخصصی(PHD)
Discipline of degree
بیوتکنولوژی پزشکی
SUMMARY OR ABSTRACT
Text of Note
اینهیبین ، یک هورمون جنسی دایمر می باشد که ابتدا به¬عنوان یک تنظیم کننده منفی سنتز هورمون FSH از غده هیپوفیز شناسایی شد. سنجش سطح سرمی اینهیبین به عنوان یک مارکر تشخیصی برای شرایط مختلف فیزیولوژیکی استفاده می¬¬شود. یکی از این موارد غربالگری پیش از تولد سندرم داون می باشد؛ بدین ترتیب اگر جنین مبتلا به سندرم داون باشد، سطح سرمی اینهیبین A مادر افزایش می یابد. سنجش سطح سرمی اینهیبن با استفاده از کیت الایزای طراحی شده بر اساس دو آنتی بادی منوکلونال علیه دو زیرواحد آن انجام می شود. این آنتی¬بادی¬ها به روش هیبریدوما تهیه شده¬اند. تامین نیاز داخلی کشور به این کیت از طریق واردات انجام می شود. تولید این کیت در داخل کشور نیاز به تهیه آنتی¬بادی منوکلونال دارد. برای تولید آنتی¬بادی منوکلونال وجود پروتئین اینهیبین به عنوان آنتی¬ژن لازم است. از آن¬جایی که مقدار اینهیبین موجود در منابع طبیعی آن کم و غیر قابل تخلیص می باشد، تهیه فرم نوترکیب آن ضروری است. هدف مطالعه حاضر کلونینگ و بیان زیرواحد α در سیستم پروکاریوتی و سپس تهیه آنتی بادی منوکلونال علیه آن به روش هیبریدوما می باشد. مواد و روش کار: پس از کلونینگ توالی کد کننده زیرواحد α در وکتورهای pET22b و pCold1، هر دو سازه به سویه¬هایBL21 ، Shuffle T7 (DE3)، Rosetta (DE3) و OrigamiTM (DE3) ترانسفورم شدند. بیان اپتیمم پروتئین در دما، زمان و غلظت مناسب IPTG، تعیین و سپس تخلیص و بازآرایی آن انجام شد. بعد از کنجوگاسیون پروتئین با KLH، تزریق به موش¬های BALB/c انجام و موش دارای بالاترین تیتر آنتی¬بادی انتخاب گردید و سلول¬های B طحال آن با رده سلولی SP2/0 ادغام شد. کلون¬های به¬دست آمده با الایزا غربالگری و کلون¬های مثبت تکثیر و فریز شدند. نتایج: سازه pET22b + inhibin α-subunitدر سویه Shuffle T7 (DE3) و سازهpCold + inhibin α-subunit در سویه OrigamiTM (DE3) بالاترین میزان بیان را نشان دادند اما بیان به شکل نامحلول (اینکلوژن بادی) بود. فرم نامحلول پروتئین استخراج و در بافر اوره 2 مولار با pH قلیایی حل شد. تخلیص پروتئین با ستون کروماتوگرافی نیکل انجام و پروتئین تخلیص شده با روش Dilution بازآرایی شد. پروتئین به¬دست آمده به عنوان آنتی¬ژن قادر به تحریک سیستم ایمنی موش را بود. فیوژن با موفقیت انجام و کلون¬های مثبت تعیین شدند. نتیجه گیری: زیرواحد α پروتئین اینهیبین بیان شده در سیستم پروکاریوتی تخلیص و به-عنوان آنتی¬ژن به موش تزریق شد. ادغام سلول¬های طحال موش ایمن شده با سلول¬های SP2/0، منجر با تشکیل سلول¬های هیبریدومایی شد که آنتی¬بادی تولید می¬کنند.
TOPICAL NAME USED AS SUBJECT
زیرواحد α اینهیبین A انسانی
بیان پروتئین
اینکلوژن بادی
منوکلونال آنتی بادی
تکنولوژی هیبریدوما
PERSONAL NAME - PRIMARY RESPONSIBILITY
Relator Code
، پديدآور
کولیوند، صدیقه
PERSONAL NAME - SECONDARY RESPONSIBILITY
Relator Code
، استاد راهنما
Relator Code
، استاد راهنما
متوسلی ، الهه
مدرسی، محمدحسین
CORPORATE BODY NAME - SECONDARY RESPONSIBILITY
Entry Element
دانشگاه علوم پزشکی تهران، دانشکده پزشکی
ORIGINATING SOURCE
Country
ایران
Date of Transaction
20230111
LOCATION AND CALL NUMBER
Call Number
۲۰۶۲ف
DATA NOT CONVERTED FROM SOURCE FORMAT
Tag of the Source Format Field
دانشگاه علوم پزشکی تهران، کتابخانه دانشکده پزشکی
p
TF
92029
a
Y
