بررسی کارایی ویرایش ژنوم (Cas۹/gRNA Ribonucleoproteins (RNPs انتقال یافته با ناتو ذرات سیلیکا مزوحفره (MSNs)
General Material Designation
[پایان نامه]
First Statement of Responsibility
پردیس رحیمی سالکده
.PUBLICATION, DISTRIBUTION, ETC
Name of Publisher, Distributor, etc.
دانشگاه علوم پزشکی تهران، دانشکده پزشکی
PHYSICAL DESCRIPTION
Specific Material Designation and Extent of Item
۸۳ص.
Other Physical Details
جدول، نمودار
Accompanying Material
سی دی
DISSERTATION (THESIS) NOTE
Dissertation or thesis details and type of degree
کارشناسی ارشد
Discipline of degree
ژنتیک انسانی
Date of degree
۱۳۹۹
Text preceding or following the note
۱۸
SUMMARY OR ABSTRACT
Text of Note
از سال 2012تا کنون یکی از مھمترین و جذاب ترین مباحث علم بیولوژی مولکولی و ژنتیک استفادهاز ابزارھای ویرایشگر ژنومی بر پایھ سیستم کریسپر بھ منظور ویرایش ژنوم موجودات بوده است.منشاء این ابزار ویرایش ژنومی باکتریھا و آرکئیھا می باشد. کریسپر یکی از مھمترین سیستم ھایدفاعی باکتریھا و آرکئیھا در برابر ویروسھا و پلاسمیدھای مھاجم می باشد. سیستم CRISPR/Cas9را میتوان بھ سھ صورت DNAبیان کننده mRNA ،Cas9بیان کننده Cas9و یا پروتئین Cas9بھسلول ھدف انتقال داد. مطالعات proof-of-conceptمزیت استفاده از فرم RNPرا برای جایگزینی ژنو اھداف درمانی درصورت وجود روش انتقال کارآمد را مورد تاکید قراردادهاند. در حال حاضرانتخابھای مختلفی برای انتقال محمولھھای small-moleculeھا در مقایسھ با کمپلس بزرگ پروتئین-اسید نوکلئیک وجود دارد. درنتیجھ ایجاد و توسعھ روشھای انتقالی کھ انتقال کارای RNPرا مقدورمی سازد تاثیر معنی داری در زمینھ کاربرد این سیستم بھ عنوان ابزار درمانی خواھد گذاشت. درسالھای اخیر رشد سریعی در عرصھ زیست پرشکی بخصوص کشف سیستمھای جدید انتقال ژن یادارو صورت گرفتھ است.نانوتکنولوژی بھعنوان یک رویکرد امید بخش ظھور پیدا کرده و محققان را جھت توسعھنانوساختارھا ترغیب کردهاست. در میان نانوساختارھای متنوع نانوذرات سیلیکا مزوحفره نسل جدیدیاز پلت فرمھای غیر آلی برای کاربردھای زیستپزشکی گشتھاند. ویژگی منحصر بھفرد آنھا ھمچونسایز یکسان منافذ، حجم بالای منافذ، سایز کلی ذره،وجود دو سطح عملکردی و سازگاری زیستیمناسب نانوذرات سیلیکا مزوحفره را کاندید مناسبی بھعنان ابزار انتقالی قرار میدھد. ھدف از اینپژوھش انتقال) Cas9/gRNA Ribonucleoproteins(RNPsبا استفاده از نانوذرات سیلیکا مزوحفره) (MSNsبھ سلول ھای HT1080کھ GFPرا بھطور پیوستھ بیان می کنند جھت knock outژن GFPدر این سلولھا و بررسی کارایی ویرایش ژنوم ) Cas9/gRNA Ribonucleoproteins(RNPsانتقالیافتھ با نانوذرات سیلیکا مزوحفره ) (MSNsمی باشد.7روش کارکشت ردههاي سلولی HEK293و HT1080انجام شد. ویروسھای حاوی pLenti6.3/V5-DEST-GFPتولید، جمع آوری و تیتر شد. Transductionرده سلولی HT1080با ویروسھای حاوی pLenti6.3/V5-DEST-GFPانجام گرفت. طراحی و سنتز gRNAبرای ژن GFPصورت گرفت. ازمجاورت سلول ھا HT1080-GFPبا Cas9/gRNA/MSNتاثیر آن بر روی سلول ھا بوسیلھ ی روش MTTو کارایی ویرایش ژنوم با استفاده از نانوذرات سیلیکا مزوحفره ) (MSNsبھ عنوان نانوحاملبوسیلھ ی فلوسایتومتری و توالییابی بررسی شدیافتههانانوذرات KIT-6در غلظتھای ١٠٠ µg/mlو کمتر از آن سمیتی برای سلولھای HT1080.GFPندارند. کارایی ویرایش ژن GFPتوسط کمپلکس ) Cas9/gRNA Ribonucleoproteins(RNPsانتقالیافتھ با نانوذرات KIT-6در سلولھای HT1080.GFPحدود ٪٣۶بودهنتیجھ گیرینانوذرات سیلیکا مزوحفره KIT-6تا به امروز براي انتقال دارو و قطعات ژنی همچنین پروتئین به صورتجداگانه مورد استفاده قرار گرفتهاند اما تا کنون براي انتقال کمپلکس Cas9/gRNA) Ribonucleoproteins(RNPsبکار نرفتھ بودند. با توجھ بھ ویژگیھای این نانوذرات ھمچون سازگاریزیستی، سایز آنها، سایز قابل تنظیم منافذ آنها و سطح عملکردي آنها که می تواند بھ لیگاندھای مختلفجھت انتقال اختصاصی متصل شود آن را کاندید خوبی برای انتقال سیستم CRISPR/CAS9قرارمیدھد. استفاده از نانوذرات KIT-6کھ یک نانوذره سیلیکا مزوحفره است برای انتقال کمپلکس) Cas9/gRNA Ribonucleoproteins(RNPsکارایی ویرایش ژنوم قابل مقایسھای با نتایج حاصل ازمطالعات با نانوذرات دیگر نشان داد و میتواند برای مطالعات بیشتر جھت توسعھ ابزارھا انتقال CRISPR/Cas9پیشنھاد شود