عنوان
پدید آورنده
موضوع
رده
کتابخانه
محل استقرار
IR
۵۴۳ط
فارسی
IR
بررسی ژنوتیپ های SCCmec و تعیین تیپ های آن و الگوی مقاومت آنتی بیوتیکی درسویه های استافیلوکوک کوآگولاز منفی مقاوم به متی سیلین در بینی دانش آموزان شهر کاشان ۱۳۹۱
[طرح تحقیقاتی]
/ رضوان منیری ، احمد خورشیدی و محمد ایروانی
؛ احمد پیروزمند و سید غلام عباس موسوی
کاشان
: دانشگاه علوم پزشکی کاشان
، ۱۳۹۲.
الکترونیکی - لوح فشرده
چکیده فارسی استافیلوکوک های کوآگولاز منفی (CoNS)که در غشای موکوسی بینی کلونیزه می شوند از پاتوژن های فرصت طلب محسوب می شوند.مقاومت به متی سیلین در میان CoNS رایج است و می توانند یک منبع مهمی از SCCmec برای استافیلوکوک ارئوس به شمار آیند .هدف از این مطالعه تیپ بندی SCCmec در سویه های استافیلوکوک های کوآگولاز منفی مقاوم به متی سیلین در بینی دانش آموزان شهر کاشان می باشد .استافیلوکوک های کوآگولاز منفی غیر تکراری با استفاده از سواپ از بینی ۶۰۰دانش آموز جدا شد .مقاومت به متی سیلین با استفاده از دیسک سفوکسیتین (۳۰g) با روش آنتی بیوگرام اندازه گیری شد .وجود ژن mecA در همه ی نمونه هایی که مقاوم به متی سیلین بودند با روشPCR تایید شد.تیپ بندی از SCCmec با استفاده از روشmultiplex PCR و تعیین کلاس ژنی mec gen complex و gen complex ccrانجام شد .شیوع MRCoNS با استفاده از روش multiplex PCR در بینی دانش آموزان انجام شد که میزان شیوع آن ۷/۱۶ بود .از ۷۲ نمونه MRCoNS بدست آمده شیوع در گونه های مختلف به صورت زیر بدست آمد .استافیلوکوک لاکتاننسیس ( ۲۱(۲۹.۲، همولیتیکوس ( ۱۷(۰.۶، ساپروفیتیکوس (۲۳.۶ )۱۷، اپیدرمیتیس ( ۹(۱۲.۵، شیلفری ۸(۱۱.۱ ). ۴۸( ۷/۶۶)نمونه حاوی یک تیپ از SCCmec بودند که تیپ (=(۵n I ، تیپ (=II (۴n ، تیپ III(۷=n) ، تیپ (=IV(۱۹n ، تیپ (۱۳=n) Vبدست آمد همچنین ( ۹/۶) ۵نمونه حاوی ۲ تیپ SCCmec بودند که(۲=n) + IV V،(۲=n) + III I،V(۱=n) + IIIبدست آمد و (۳/۳۳)۲۴ نمونه قابل تیپ بندی نبودند .تیپ IV بیشتر در استافیلوکوک لاکتاننسیس و تیپ V بیشتر در استافیلوکوک همولیتیکوس دیده شد SCCmec .تیپ IV و VدرCoNS - MRشایعترند و برخی گونه ها می توانند همزمان بیش از یک تیپ را حمل کنند .سابقه و هدف تعیین تیپ های مختلف ژنmec - SCCو الگوی مقاومت آنتی بیوتیکی درسویه های استافیلوکوک های کوآگولاز منفی مقاوم به متی سیلین در بینی دانش آموزان شهر کاشان .مواد و روشها نمونه های جمع آوری شده از دانش آموزان مدارس مختلف شهر کاشان در محیط مانیتول سالت آگار به آزمایشگاه میکروب شناسی دانشکده پزشکی دانشگاه علوم پزشکی کاشان منتقل و ۲۴ ساعت در دمای ۳۷ درجه سانتیگراد انکوبه شد .شناسایی کولونی ها در سطح گونه با استفاده از تست های بیوشیمیایی نظیر رنگ آمیزی گرم، کاتالاز , کواگولاز، باسیتراسین، اکسیداز ,تخمیر مانیتول ،تست اوره و تست DNase انجام گردید .مقاومت به متی سیلین با استفاده از دیسک سفوکسیتیم ۳۰ میکروگرمی تهیه شده از شرکت Mast انگلستان و مطابق با معیار (CLSI) تعیین گردید .الگوی حساسیت و مقاومت آنتی بیوتیکی با روش دیسک دیفیوژن با دیسک های آنتی بیوتیکی اریترومایسین)إg۱۵)، کلیندامایسین)إ g۲)، سیپروفلوکساسین) إg۵)، تری متوپریم)إ g۵)سولفامتاکسازول)إg۱.۷۵)، جنتامایسین) إg۱۰)، آمیکاسین) إ g۳۰)، سفوکسیتین) إ g۳۰)انجام پذیرفت .سویه استافیلوکوکوس اورئوس ۳۳۵۹۱ATCC به عنوان کنترل مثبت و سویه ۲۵۹۲۳ATCC به عنوان کنترل منفی برای ژن mecA استفاده شد .( ۱)استخراج DNAتوسط روش جوشاندن انجام پذیرفت DNA .استخراج شده در آب مقطر دی یونیزه و در فریزر۲۰ - درجه سلسیوس ذخیره گردید .شناسایی ژن mec با روش PCR به صورت زیر انجام شد .انجام تست مولکولی multiplex PCR برای تعیین تیپ های :SCCmec ۷میکرولیتر از DNA استخراج شده را با ۱۸ میکرولیتر از مخلوط PCR مخلوط می نماییم .جدول شماره ی : ۱مواد و حجم استفاده شده برای تهیه ی مخلوط واکنش PCR ماده‌حجم)میکرولیتر PCR Buffer(۱۰X)۵/۲ DNTPs۵/۰ MgCl۲۷۵/. Taq DNA polymerase۲۵/۰ DNA۷ H۲O۱۲ Primers۲ (جدول شماره ی:۲ پرایمرهای مورد استفاده به شرح زیر هستند پرایمرترادف نکلئوتیدی۵)- (۳اندازه ی (bp) قطعه‌اختصاصیت‌مرج به صورت زیر در ترموسیکلر برنامه ریزی و انجام شد تکثیر ژن هدف شامل مراحل دناتوراسیون اولیه درC۹۴به مدت ۵دقیقه سپس۱۰ سیکل به صورت۹۴ Cبه مدت ۴۵ ثانیه، ۶۵ Cبه مدت ۴۵ ثانیه و ۷۲ Cبرای ۹۰ ثانیه ،سپس ۲۵ سیکل به صورت ۹۴ Cبه مدت ۴۵ ثانیه، ۵۵ Cبه مدت ۴۵ ثانیه و۷۲C برای ۹۰ ثانیه و مرحله طویل شدن نهایی در۷۲C برای ۱۰ دقیقه انجام گردید .برای ژن ccrC سیکل دیگری به صورت زیر در ترموسیکلر برنامه ریزی شد تکثیر ژن ccrC شامل مراحل دناتوراسیون اولیه درC۹۴به مدت ۵دقیقه سپس۳۰ سیکل به صورت ۹۴ Cبه مدت۱ دقیقه، ۵۰ Cبه مدت۱ دقیقه و۷۲ Cبرای ۲ دقیقه و مرحله طویل شدن نهایی در۷۲C برای ۱۰ دقیقه انجام پذیرفت .الکتروفورز محصولات PCR در ژل آگارز ۲حاوی gr/ml ۵/.۰اتیدیوم بروماید انجام شد و نتایج توسط دستگاه ترانس لومیناتور مشاهده گردید .از مارکرbp ۱۰۰برای تایید وزن مولکولی محصولات تکثیر شده PCR استفاده گردید .با توجه به تیپ های مختلف باند های bp ۱۶۰۰ ۱۴۶مثبت در نظر گرفته شدند .(۲) .نتیجه گیری تیپ های IV و V شایعترین تیپ های SCCmec درCoNS - MRمی باشند و تعداد کمی ازCoNS - MRمی توانند بیش از یک تیپSCCmec را در خود داشته باشند .کلیدواژه ها استافیلوکوک کوآگولاز منفی :(CNS)کوکسی گرم مثبت خوشه ای شکل از خانواده استافیلوکوکاسیه است متی سیلین :از دسته پنی سیلین های نیمه سنتتیک است که در درمان عفونت های استافیلوککی که مفاوم به درمان با پنی سیلین شده اند به کار می رود .استافیلوکوک کوآگولاز منفی مقاوم به متی سیلین :(MRCNS)کوکسی گرم مثبت خوشه ای شکل از خانواده استافیلوکوکاسیه که فاقد آنزیم کوآگولاز و مقاوم به آنتی بیوتیک متی سیلین می باشند ژن :mecA این ژن باعث مقاومت به متی سیلین می شود .جایگاه ان در قطعه ژنتیکی متحرک SCCmec در کروموزوم باکتری استافیلوکوک اورئوس است :SCCmec (staphylococcal cassette chromosome) .ژن مقاومت به متی سیلین (mecA) بر روی این قطعه است SCCmec .دارای ۵ تیپ استSCCmecI :،SCCmecII ،SCCmecIII ،SCCmec IV ، SCCmecV تیپ SCCmec IV خود دارای ۴ ساب تایپSCCmec IVa ،SCCmec IVb ، SCCmec IVd , SCCmec IVcمی باشد.تایپینگ براساس تفاوت نوکلئوتیدها در دو کمپلکس ژنی mec و ccr انجام می پذیرد
استافیلوکوک کوآگولاز منفی
استافیلوکوک کوآگولاز منفی مقاوم به متی سیلین
متی سیلین
مقاومت باکتری به دارو
منیری، رضوان، مجری اول
خورشیدی، احمد ، مجری دوم
ایروانی، محمد ، مجری سوم
پیروزمند، احمد ، همکار طرح
موسوی، سید غلامعباس ، همکار طرح
ایران
ط۵۴۳،۴۴،۱۳۹۲
فهرستنویسی قبلی
ec
XF
1
a
Y
