اثر غلظتهای مختلف اکسین و سیتوکنین روی شاخه زایی از قطعات برگی دورگه هلو - بادام"GF ۶۷۷ "
/اشرف السادات مرکفشی
: کشاورزی
، ۱۳۸۷
۹۱ ص
چاپی
کارشناسی ارشد
باغبانی - میوه کاری
۱۳۸۷/۱۱/۱۱
تبریز
کشت قلمههای تک جوانهGF ۶۷۷ در محیط کشت استقرار) محیط کشت WPM همراه با ۵/۰ میلیگرم در لیتر BAP و ۱/۰ میلیگرم در لیتر IBA) انجام شد و پس از یک ماه ۶۴ درصد ریز نمونههای کشت شده دارای شاخههای بیشتر از ۵/۱ سانتیمتر با ۴/۴ برگ بودند .نتایج آزمایشهای بهینه سازی محیط کشت نگهداری نشان داد که محیط کشت AP با ۵/۰ میلیگرم در لیترBAP ، ۴ میلیگرم در لیتر GA۳ و ۲۰۰ میلیگرم در لیتر کازئین هیدرولیز شده برای رشد و پرآوری شاخساره ها بهینه می باشد .با انجام باز کشتهای ماهانه تعداد زیادی شاخساره درون شیشه ای حاصل شد .قطعات برگی از قسمت پشتی روی محیط کشت MS حاوی چهار غلظتNAA ( ۵/۰ ،۱ ، ۲ و ۳ میلیگرم در لیتر (در ترکیب با ۵ غلظتBAP (۵/۰ ،۱ ،۵/۱ ،۲ ، ۳ و ۴میلیگرم در لیتر(، کشت گردید .در همه تیمارها کالزایی مشاهده شد اما درصد کالزایی از ترکیب هورمونی متاثر نشد .در آزمایشی دیگر جهت ارزیابی اثر منشا ریزنمونه) گیاهان درون شیشه ای و برون شیشه ای( قطعاتی برگی حاصل از گیاهان درون شیشه ای و مزرعه ای روی محیط کشت MS حاوی ۰ و ۲/۰ و ۴/۰ میلیگرم در لیتر NAA و ۵/۰ الی ۲میلیگرم در لیتر BAP کشت گردید .درصد کالزایی در همه محیط های کشت، یکسان بود اما درصد کالزایی در ریز نمونه های درون شیشه ای به مراتب از مزرعه ای بیشتر بود .نتایج مشابهی از جایگزین کردن TDZ به جایBAP ، از نظر کالزایی و رشد کال، بدست آمد بطوریکه شاخه زایی در ترکیبات هورمونی TDZ و NAA مشاهده نشد .اعمال شوک۲,۴ - Dو نیز استفاده از ترکیب سه هورمونkin ، BAP و NAA در محیط کشت AP نتواست باعث شاخه زایی شود .کشت قطعات برگی روی محیط کشت القا شاخساره انجام شد و هر چند که کال زایی اتفاق افتاد ولی جنین سوماتیکی تشکیل نشد .کالزایی از قطعات برگی در محیط های کشت AP حاوی غلظتهای بالای سه نوع سیتوکنین(TDZ ، BAP و Zeatin) انجام شد ولی فقط در ۵ و ۱۰ میلی گرم در لیتر TDZ شاخه زایی مشاهده شد .جهت مشخص شدن غلظت مناسب TDZ برای شاخه زایی ،از غلظتهای ۵ و ۱۵ میلی گرم در لیتر در محیط کشت AP استفاده شد و مشخص گردید که در محیط های کشت AP حاوی ۵ میلی گرم در لیتر) TDZ با و بدون ( IBAو ۱۵ میلی گرم در لیتر TDZ شاخه زایی اتفاق می افتد با این حال تفاوت معنی داری بین غلظتهای مختلف TDZ مشاهده نشد، بنابراین استفاده از ۵ میلی گرم در لیتر TDZ به تنهایی یا در ترکیب با ۰۱/۰ میلی گرم در لیتر IBA می تواند در شاخه زایی از قطعات برگی توصیه می گردد
Shoot tips of the rootstock GF677, in February, 2008, surface sterilized and single node cuttings were cultured on initiation culture medium (WPM containing 0.5 mg/l BAP and 0.1 mg/l IBA). After one month, 64 percent of the explants produced shoots (more than 1.5 cm long) and leaves (an average of 4.4 leaves/shoot). In June, 2008, single node cuttings were cultured on AP culture medium supplemented with different BAP concentrations and despite a high rate of contamination, lateral buds grew and maximum initiation and growth were obtained in AP medium with 0.5 mg/l BAP. The results of the optimization experiment for the maintenance medium showed that AP medium with 0.5 mg/l BAP, 4 mg/l GA3 and 200 mg/l casein hydrolysate was the best for growth and multiplication of GF677 shoots with and without the original explants. Shoot multiplication was achieved through monthly subcultures. Leaf segments were put on shoot induction medium with their abaxial side down. Shoot induction medium was MS containing the combinations of BAP (0.5, 1, 2, 3, 4 mg/l) and NAA (0.5, 1, 2, 3 mg/l) in each of which BAP was more than NAA. Callus induction was observed in all treatments; however, callus induction percentage was not affected by different BAP and NAA combinations. In another experiment, in order to evaluate the effect of the origin of explants (in vitro or ex vitro) on callus and shoot induction, leaf segments prepared from in vitro and ex vitro plants were cultured on MS medium containing the combinations of 0, 0.2, 0.4 mg/l NAA and 0.5-2 mg/l BAP in each of which BAP was again more than NAA. The results were the same for callus induction percentage; however, callus induction percentage in in vitro-derived explants was more than that in ex vitro-derived ones. Furthermore, the substitution of TDZ made no difference in callus induction and growth and no shoot regeneration was observed. Using 2,4-D shock and combinations of Kin, BAP and NAA, all in AP medium, could not even cause shoot regeneration and somatic embryogenesis in cultured leaf segments; however, callus induction happened. Callus induction from leaf segments occurred in AP medium with high concentrations of TDZ, BAP and Zeatin. Nevertheless, only 5 and 10 mg/l TDZ caused shoot regeneration. For optimizing the concentration of TDZ, 5, 10 and 15 mg/l of it were used in AP medium, but 5 (with or without 0.01 IBA) and 15 mg/l TDZ caused shoot regeneration without any significant difference in percentage. Finally, 5 mg/l TDZ with or without 0.01 mg/l IBA was considered as the betreatment for shoot regeneration from leaf segments