عنوان

بررسی اثر رزمارینیک اسید بارگذاری با اگزوزوم های مشتق از سرم ، بر روی كاهش التهاب وبهبود لانه گزینی در موش های دچار آندومتریت القایی

پ۲۹۳۱۳

per

بررسی اثر رزمارینیک اسید بارگذاری با اگزوزوم های مشتق از سرم ، بر روی كاهش التهاب وبهبود لانه گزینی در موش های دچار آندومتریت القایی

مرتضی طراوت رای

دامپزشکی

۱۴۰۲

۷۶ص.

سی دی

دکتری

فناوری تولید مثل در دامپزشکی

۱۴۰۲/۰۶/۰۴

آندومتریت یک بیماری التهابی و هیستوپاتولوژیک در بافت های رحمی است که باعث اشکال و شکست در لانه گزینی جنین می شود. در این مطالعه، رزمارینیک اسید (RA) به عنوان یک عامل ضد التهابی که در اگزوزوم ها ی مشتق از سرم موشی بارگذاری شده بود و برای بهبود آدومتریت ناشی از لیپوپلی ساکارید (LPS) و متعاقباً بهبود لانه گزینی استفاده شد. برای این منظور، اگزوزوم‌های استخراج‌شده از سرم با RA به روش سونیکاسیون بارگذاری شدند و سپس در گروه‌های تیمار شامل: کنترل، گروه القای LPS، گروه تجویز RA در دوز های 5 و 10 mg/kg، گروه تجویز اگزوزوم در دوز های 5 و 10 mg/kg،گروه RA به علاوه اگزوزوم در دوز های 5 و 10 mg/kg (R+E) و گروه های RA بارگذاری شده با اگزوزوم در دوز های 5 و 10 mg/kg (RLE)تجویز شدند و این گروه های درمانی 24 ساعت پس از القای اندومتریت به دیواره ی بیرونی شاخ رحم تزریق شدند. پس از االقای التهاب، برای بررسی روند درمانی، ارزیابی پاتولوژیک با رنگ آمیزی (H&E)، اندازه گیری میزان MPO با اسپکتوفتومتری و بیان ژن و پروتئین مرتبط با التهاب با روش qPCR و ایمنوهیستوشیمی سنجیده شدند. سپس بر اساس داده های پاتولوژی بهترین گروه های تیمار،هر 3 موش ماده در هر گروه با یک موش های نر جفت شدند. اثر گروه درمان بر میزان لانه گزینی، سطح پروژسترون و بیان ژن به ترتیب با رنگ‌آمیزی شیکاگو بلو، الایزا و qPCR ارزیابی شد. نتایج نشان داد که گروه‌های درمانی و عمدتاً گروه‌های RLE10 و R10+E10 می‌توانند تغییرات پاتولوژیک ناشی از التهاب را تعدیل کنند، فعالیت میلوپراکسیداز (MPO) را مهار کرده و به طور قابل‌توجهی بیان ژن و پروتئین TLR4، NLRP3، سایتوکین‌های التهابی مانند IL-1β،IL-18،TNF-αو GSDM-D به عنوان فاکتور پایروپتوزییس را تنظیم و کاهش دهند.علاوه بر این در مورد موش های جفت گیری شده نتایج به‌دست‌آمده نشان دادند، گروه‌های RLE10 و R10+E10 باعث افزایش سطح پروژسترون سرم خون، افزایش نرخ لانه گزینی شده و همچنین باعث افزایش سطح بیان ژن‌های LIF و Muc-16 می شود. علاوه بر این، سطح بیان سایتوکین های التهابی، از جمله TGF-β و IL-10، IL-15، و IL-18، به طور مشخصی تنظیم و کاهش یافت. همچنین نتایج مشخص کردند که بیان ژن‌های LIF، Muc-16 و همچنین IL-18 با غلظت پروژسترون سرم و میزان لانه گزینی در گروه‌های درمان همبستگی معنی‌داری داشت. در نتیجه، RA بارگذاری شده و ترکیب با اگزوزوم ها با دوز 10 mg/kg (RLE10 و R10 + E10) آندومتریت را در موش از طریق مهار مسیر سیگنالینگ TLR4-NLRP3 بهبود بخشیده و باعث بهبود وضعیت لانه گزینی بعد از درمان می شود.

AbstractEndometritis is an inflammatory and histopathological disease in uterine tissues that causes problems and failure in embryo implantation. In this study, rosmarinic acid (RA) was used as an anti-inflammatory agent loaded into mice serum-derived exosomes to improve lipopolysaccharide (LPS)-induced endometritis and subsequent implantation. For this purpose, exosomes extracted from serum were loaded with RA by sonication method and then divided into treatment groups including: control, LPS induction group, RA treatment group at doses of 5 and 10 mg/kg, exosome treatment group at doses of 5 and 10 mg/kg, RA combination with exosome at doses of 5 and 10 mg/kg (R+E) and RA groups loaded with exosome at doses of 5 and 10 mg/kg. These treatment groups were injected into the outer wall of the uterine horn 24 hours after the induction of endometritis. After the induction of inflammation, to investigate the effectiveness of treatment process, pathological evaluation with staining (H&E), measurement of MPO level with spectrophotometry and expression of gene and protein related to inflammation were measured by qPCR and immunohistochemistry methods. Then, based on the pathology data, the best treatment groups each three female mice mated with male mice. The effect of treatment group on implantation rate, progesterone level and gene expression were evaluated by Chicago Blue staining, ELISA and qPCR, respectively. The results showed that the treatment groups and mainly the RLE10 and R10+E10 groups can moderate the pathological changes caused by inflammation, inhibit myeloperoxidase (MPO) activity and significantly regulate and reduce the gene and protein expression of TLR4, NLRP3, inflammatory cytokines such as IL-1β, IL-18, TNF-α and GSDM-D as a pyroptosis factor. In addition, in the case of mated mice, the results showed that the RLE10 and R10+E10 groups increase the blood serum progesterone level, increase the implantation rate, and also increase the expression level of LIF and Muc-16 genes. In addition, the expression levels of inflammatory cytokines, including TGF-β and IL-10, IL-15, and IL-18, were markedly upregulated and decreased. Also, the results showed that the expression of LIF, Muc-16 and IL-18 genes had a significant correlation with serum progesterone concentration and implantation rate in the treatment groups. In conclusion, RA loaded and combined with exosomes at a dose of 10 mg/kg (RLE10 and R10 + E10) ameliorated endometritis in mice through inhibition of TLR4-NLRP3 signaling pathway and improved implantation status after treatment.

Investigating the effect of Rosmarinic acid loaded with serum-derived exosomes on reducing inflammation and improving implantation in mice with induced endometritis.

طراوت رای،‏

‏ مرتضی

تهیه کننده

‏اسدپور،

جعفری جوزانی،

فتاحی،

خردادمهر،

‏رضا

‏ رضی الله

‏ امیر

منیره ‏

استاد راهنما

استاد راهنما

استاد مشاور

استاد مشاور

تبریز