عنوان

طراحی و ساخت کاست بیانی برای مولتی مریزاسیون پپتید دارویی کوکسینین

پ۲۵۴۶۷

per

طراحی و ساخت کاست بیانی برای مولتی مریزاسیون پپتید دارویی کوکسینین

امیررضا فرهادنیا

کشاورزی

۱۴۰۰

۸۴ص

سی دی

کارشناسی ارشد

بیوتکنولوژی کشاورزی

۱۴۰۰/۰۷/۲۹

چکیده:پپتیدها و پروتئین¬ها، از مولکول¬های زیستی جانداران می¬باشند ودارای مصارف کاربردی گوناگونی اعم از دارویی و تغذیه¬ای هستند. پپتیدها می¬توانند از منابع مختلف گیاهی، قارچی و جانوری استخراج شوند. یکی از این پپتیدهای گیاهی کوکسینین نام دارد که از نوع defensin های ضد قارچ می¬باشد. این پپتید از گیاه لوبیای زینتی (Phaseolus coccineus) استخراج می¬شود. علاوه بر این که این پروتئین در خود گیاه در برابر پاتوژن¬ها واکنش نشان می¬دهد، می¬تواند به عنوان یک پپتید دارویی علیه بیماری¬هایی مثل لوسمی و HIV-I نیز موثر واقع شود. امروزه با پیشرفت¬هایی که در بیوتکنولوژی انجام شده است می¬توان این پپتیدهای دارویی را شناسایی و در سیستم¬های گوناگون تولید کرد. تولید انبوه مولتیمری مولکول¬های کوچک مثل پپتیدها، یکی از روش¬های غلبه بر عملکرد پایین و تخریب آن¬ها در سیستم¬های تولید بیولوژیک می¬باشد. در این تحقیق با کمک یک لینکر پپتیدی و با تعبیه¬ی مکان¬های برش آنزیمی سه گانه در دو انتهای قطعه¬ی رمزگردان کوکسینین، اقدام به تولید کاست پایه¬ی مونومری برای مولتیمریزاسیون همسو گردید. در قدم اول از طریق بانک پپتیدی و نرم افزار رونویسی معکوس، توالی¬های رمزگردان به دست آمد. سپس در مرحله¬ی دوم طراحی آغازگرهای بلند حاوی کلیه¬¬ی اطلاعات توالی رمزگردان پپتید، لینکر پپتیدی و مکان برشیPstI ، مکان¬های ایزوشیزومر SalI و XhoI انجام و برای سنتز سفارش داده شدند. در مرحله¬ی سوم PCR تک چرخه¬ای برای سنتز کاست مونومر انجام و سپس اقدام به همسانه سازی آن در وکتور p.TG19 گردید. ساخت سازه¬ی دیمر و تریمر و غیره، از طریق برش و ساب کلونینگ با سه مکان تعبیه شده در کاست در بخش ابتدایی کاست مونومر قابل انجام بوده و از همین روش تولید کاست دیمر انجام گرفت. برای تایید همسانه سازی مرحله¬ی دوم که منجر به تطویل ناحیه¬ی رمز گردان می¬گردد، از طریق برش آنزیمی اقدام شد.

Abstract Peptides and proteins are from the biological molecules of the organisms and are a variety of applications, including pharmaceutical and nutrition. Peptides can be extracted from various sources of plant, fungal and animal. One of these potent peptides is the coccinin that is of antifungal defensins. This peptide is extracted from the phaseolus coccineus plant, in addition to the protein reacts in plant itself against pathogens, it can be used as a peptide against diseases such as leukemia and HIV-I will also be effective. Today, with the advances made in biotechnology, these peptides can be identified and produced in various systems. Multimerisation of small molecules such as peptides is one of the methods to overcome low yield and destroy in biological production systems. In this research, with the design of a peptide linker and triple enzymatic cutting locations, the production of monomeric and cystic caste to multimedia was performed. In the first step, Bio Informatics studies were widely used, in the second stage, the design of long primers contains peptide noctement sequences, peptide linker and PSTI shear locations, Sali and XHOI. In the third stage, the single cyclic PCR is performed for the synthesis of the monomer cassette and then survive its cloning in the PGT vector. The construction of a dimmer structure, through the subcloning in the early part of the cassette, was continuously followed up and according to the schemem provided in materials. So with any number of monomers, the subcloning can be continued. After ending the cloning, the results of the cassette production were performed by confirmation of enzymatic cutting.

Design and construction of expression cassette for multimerization of coccinin peptide

‏فرهادنیا،

‏امیررضا

تهيه کننده

‏باغبان کهنه روز،

قلی زاده،

بهرام ‏

‏ اشرف

استاد راهنما

استاد مشاور

‏ تبریز