شناسایی گونههای Monilinia مرتبط با بیماری پوسیدگی قهوهای درختان میوههستهدار در شمال استان آذربایجانغربی
/مریم لقوانی
: کشاورزی
، ۹۳
چاپی
کارشناسی ارشد
بیماری شناسی گیاهی
۱۳۹۴/۰۶/۱۶
تبریز
درختان میوه هستهصدار در برابر طیف وسیعی از عوامل بیماریصزای گیاهی از قبیل باکتریصها، ویروسصها، نماتدها و قارچصها حساس میصباشند .شانکر باکتریایی، شانکر لئوکوستومایی، سفیدک پودری و پوسیدگی قهوهصای میوه از مهمترین بیماریصهای درختان میوه هستهصدار بهصشمار میصروند .گونهصهای جنس Monilinia موجب پوسیدگی قهوهصای میوه روی درختان میوه هستهصدار) هلو، شلیل، گیلاس (و دانهصدار) سیب، گلابی و به (میصشوند .جنس Monilinia با فرمصغیرجنسیMonilia ، در خانواده Sclerotiniaceae و راستهHelotiales واقع شده است و عموما موجب بلایت شکوفه، بلایت سیخک و پوسیدگی قهوهصای میوه طی فصل رویشی و در انبار میصشود .چهار گونه دخیل در بیماری پوسیدگی قهوهصای شامل Monilinia fructigena, M. fructicola, M. laxa, M. polystromaمیصباشند .علیصرغم شیوع بیماری پوسیدگی قهوهصای میوه در باغات درختان میوه هستهصدار در استان آذربایجان-غربی، گونهصهای Monilinia دخیل در بیماری ناشناخته باقی ماندهصاست .تحقیق حاضر با هدف شناسایی ریختصشناختی و مولکولی گونهصهای Monilinia و ارزیابی کارایی جدایهصهای آنتاگونیست .(Penicillium expansum, Trichoderma harzianum T۲۲, Clonasthachys rosea, Chaetomium sp., Trichoderma brevicampectum S۱, Wilsonomyces sp و جدایه ناشناخته مخمر (در کنترل بیماری صورت گرفت .در طی نمونهصبرداری از باغات درختان میوه هستهصدار در فصل رشدی سال ۹۲ - ۹۳تعداد ۱۲۳ نمونه از شهرستانهای مختلف استان آذربایجانصغربی شامل ارومیه، سلماس، خوی، نوشینصشهر، چنقرآلوی-پل، کریمصآباد، رحیمصآباد، عسگرآباد، عربلویصدره، اشنویه جمعصآوری شد .گونه قارچی عامل پوسیدگی بر اساس منابع معتبر، استفاده از ویژگیصهای ریختصشناختی در سه نوع محیط کشت و روشصهای مولکولی با استفاده از آغازگرهای اختصاصی گونه، توالی ناحیهrDNA - ITS و نیز مقایسه جدایهصها با جدایهصهای مرجع گونهصهای رایج Monilinia، بهصعنوان M. laxa شناسایی شد .این گونه از ۸۸ نمونه گیاهی جداسازی شده و بهصعنوان عامل پوسیدگی قهوهصای درختان میوه هستهصدار در این استان تعیین گردید .نتایج حاصل از ارزیابی کارایی و حساسیت آغازگر شامل تهیه سری رقت و استخراج DNA از میوه-های مایهصزنی شده با قارچ M. laxa در زمانصهای مختلف) ارزیابی در شرایط طبیعی (و بررسی کارایی آغازگرها در تشخیص اختصاصی گونه .laxa Mاز سایر گونهصهای قارچی در آلودگی مخلوط نشان داد که آغازگر اختصاصی قادر به شناسایی قارچ .laxa Mدر آزمایشصهای فوق بوده و هیچ باندی از گونهصهای متعلق به سایر جنسصهای قارچی تکثیر نگردید .تجزیه و تحلیل دادهصهای مربوط به ارزیابی روشصهای بیوکنترلی شامل کشت متقابل، مواد فرار و مواد غیرفرار اتوکلاوشده با غلظتصهای مختلف با استفاده از نرمصافزار SPSS نشان داد که از نظر میانگین مقادیر بازدارندگی از رشد قارچ M.laxa در ۵ نوع آنتاگونیستTrichoderma brevicampectum S۱ ،sp. Cheatomium،T۲۲ harzianum Trichoderma ، sp. Wilsonomycesو جدایه ناشناخته مخمر، بیشترین میزان بازدارندگی مربوط به مواد غیرفرار اتوکلاوشده با مقدار ۵۶/۶۷ درصد و کمترین بازدارندگی مربوط به ترکیبات فرار با مقدار ۶۳/۵ درصد می باشد .در مقایسه بین آنتاگونیست ها نیز از نظر میانگین بازدارندگی در ۶ روش مورد استفاده، بیشترین بازداری از رشد قارچ M. laxa با مقدار ۳۲/۷۶ مربوط به آنتاگونیست sp. Cheatomiumو کمترین بازداری از رشد قارچ M. laxa با مقدار ۹۹/۱۰ مربوط به جدایه ناشناخته مخمر میصباشد .تجزیه و تحلیل دادهصها با استفاده از نرمصافزار SPSS واستفاده از آزمونTest - t در سطح احتمال ۵ درصد نشان داد که مایهصزنی آنتاگونیست بلافاصله بعد از مایهصزنی با Monilinia ، میانگین بازدارندگی در حدود ۹۴/۵۳ درصد و ۲۴ ساعت بعد از مایهصزنی با Monilinia ، میانگین بازدارندگی در حدود ۷۵/۳۵ را داشت .از نظر میانگین دو روش ذکر شده، آنتاگونیست .Wilsonimyses spبا مقدار ۴۶/۷۰ بیشترین درصد بازدارندگی و جدایه ناشناخته مخمر با ۷۹/۱۴ کمترین درصد بازدارندگی را داشت
Stone fruit trees are susceptible to a wide range of plant pathogens such as bacteria, viruses, nematodes and fungi. Bacterial canker, Leucostoma canker, powdery mildew and brown rot are among the most important stone fruit trees diseases.Monilinia species cause brown rot on stone fruit trees (peaches, nectarines, cherries) and seed fruit trees (apples, pears and quince). Monilinia (asexual stage= Monilia), is classified in family Sclerotiniaceae, order Helotiales. The members of this genus generally cause blossom blight, and fruit rot during the growing season and in storage. Four species namely, Monilinia fructigena, M. fructicola, M. laxa and M. polystroma are involved in brown rot diseases. Despite the incidence of brown rot on stone fruit tree orchards in WestAzarbaijan province, the identiy of Monilinia species involved in the disease mainly remains unknown. The present study was aimed to characterise Monilinia spp involved in brown rot diseases of stone fruit trees by using morphologican and molecular data and to evaluate efficiency of antagonistic fungi (Penicillium expansum, Trichoderma harzianum T22, Clonasthachys rosea, Chaetomium sp., Trichoderma brevicampectum S1, Wilsonomyces sp. and a yet uncharacterized yeast isolates) in disease control. During sampling from stone fruit tree orchards in 2013- 2014 growing seasons a total number of 123 sample were collected from the Urmia, Salmas, Khoy, Nooshinshahr, ChanqeraluyPol, KarimAbad, RahimAbad, Asgar-abad, Arabluydarreh, Oshnaviye regions in West Azarbaijan and Shabestar region in East-Azarbaijan province. A total number of 88 Monilinia isolates were recovered from the collected samples. Morphological and molecular characterization of the isolates revealed the identity of the isolates as Monilinia laxa, which was isolated from 63 isolated plant samples and determined as the brown rot factor in stone fruit trees of this province. The results of the efficiency and sensitivity investigation of the species- specific primer set showed that this primer set only amplifies the DNA from Monilinia laxa in naturally infected fruits and in mixed inoculation of fruits with other fungal species under laboratory conditions. The antagonistic assay results, including dual culture, volatile and autoclaved nonvolatile metabolites showed that totally autoclaved nonvolatile metabolites have the highest inhibition rate in the growth of M. laxa (67.56 ) and volatile metabolites have the lowest inhibition rate in the growth of M. laxa (5.63 ). The isolated Cheatomium showed the maximum inhibitory rate in M. laxa by 76.32 percent, and yeast strain has the minimum inhibitory rate in M. laxa by 10.99 percent.The data analysis in SPSS, using t-Test with the probability level of 0.05 showed that the inoculation of the antagonist has the inhibitory effect of 53.94 percent immediately after the Monilinia inoculation, and 35.75 percent in 24 hours after Monilinia inoculation. The Wilsonimyses antagonist showed the maximum inhibitory rate by 70.46 percent, and yeast strain has the minimum inhibitory rate by 14.79 percent