عنوان

تلفیق روش‌های جدید پیش تیمار با روش‌های کروماتوگرافی و الکتروفورز مویین به منظور اندازه‌گیری داروهای قلبی- عروقی در مایعات بیولوژیک

‭۱۰۰۹۵پ‬

per

تلفیق روش‌های جدید پیش تیمار با روش‌های کروماتوگرافی و الکتروفورز مویین به منظور اندازه‌گیری داروهای قلبی- عروقی در مایعات بیولوژیک

/رعنا فاضلی بختیاری

: شیمی

چاپی

دکتری

شیمی تجزیه

‮‭۱۳۹۴/۰۳/۲۵‬

تبریز

در بخش اول یک روش الکتروفورز مویین ناحیه‌صای ‮‭(CZE)‬ ساده و حساس برای آنالیز سه داروی بتابلوکر در نمونه صی ادرار توسعه و صحه گذاری شد .در این مطالعه، به منظور پاکسازی نمونه‌صی بیولوژیک و بهبود حساسیت، از تلفیق روش استخراج مایع-مایع با استفاده از پدیده‌صی کاهش حلالیت با افزایش نمک ‮‭(SALLE)‬ با روش تمرکز نمونه با تقویت میدان ‮‭(FASS)‬ استفاده شد .تحت شرایط بهینه، خطیت خوبی ‮‭(۹۹۸/۰ ۲r)‬ برای پروپرانولول و متوپرولول در محدوده‌صی غلظتی‮‭۰۲۵/۰ -۱ ۱-g mL‬ و برای کارودیلول در محدوده‌صی‮‭۰۵/۰ -۱ ۱-g mL‬ در نمونه های ادرار بدست آمد .حدود تشخیص ‮‭(LODs)‬ و کمترین حد تعیین مقدار ‮‭(LLOQs)‬ به ترتیب در محدوده‌صی‮‭۰۰۵/۰ -۱ ۰۱۵/۰ -g mL‬ و‮‭۰۲۵/۰ -۱ ۰۵/۰-g mL‬ قرار داشتند .انحراف استاندارد نسبی ‮‭(RSD)‬ آنالیزهای درون روزی و بین روزی ترکیبات مورد بررسی کمتر از ‮‭۷/۱۰‬ بودند و مقادیر بازیابی بدست آمده در محدوده‌صی‮‭۹۸ - ۱۱۹‬ قرار داشتند .روش صحه گذاری شده به طور موفقیت آمیزی برای تعیین پروپرانولول، متوپرولول و کارودیلول در نمونه های ادرار بیماران دریافت کننده این داروها به کار گرفته شد .در بخش دوم یک روش ‮‭CZE‬ جدید برای آنالیز چهار داروی آنتی آریتمی در نمونه های پلاسما توسعه و صحه گذاری شد .در این مطالعه به منظور پاکسازی نمونه‌صی بیولوژیک و بهبود حساسیت ،از تلفیق روش میکرواستخراج مایع-مایع پخشی ‮‭(DLLME)‬ و روش ‮‭FASS‬ استفاده شد .تحت شرایط بهینه‮‭CZE -FASS- DLLME‬فاکتورهای بهبود در محدوده‌صی‮‭۱۵۷ - ۳۱۴‬قرار داشتند .روش پیشنهادی در نمونه‌صی پلاسما و در محدوده‌صی غلظتی‮‭۲۰ -۱ ۸۰۰-ng mL‬صحه گذاری شد .مقادیر دقت و صحت بین روزی و درون روزی کمتر از ‮‭۲۰‬ بودند ‮‭LODs‬ .در محدوده‮‭۵/۲ -۱ ۷/۴ -ng mL‬قرار داشتند .در نهایت، روش صحه گذاری شده به طور موفقیت آمیزی برای آشکارسازی داروهای مورد مطالعه در نمونه‌صهای پلاسمای بیماران به کار گرفته شد .در بخش سوم یک روش سریع و حساس برای اندازه‌صگیری همزمان پنج داروی آنتی آریتمی در نمونه های پلاسما با استفاده از کروماتوگرافی مایع با کارایی بالا با آشکارساز فرابنفش‮‭UV) - (HPLC‬توسعه و صحه‌صگذاری شد .که شامل ‮‭DLLME‬ داروهای مورد نظر از ‮‭۶۶۰‬ ‮‭L‬نمونه پلاسما و جداسازی تحت شرایط ایزوکراتیک و و آشکارسازی در طول موج ‮‭nm ۲۰۰‬ می‌صباشد .جداسازی همه ترکیبات مورد بررسی در کمتر از ‮‭min ۷‬ امکانپذیر است .فاز رویی بدست آمده از مرحله ترسیب پروتئین) حلال پخش کننده (با ‮‭۱۰۰‬ ‮‭L‬دی کلرومتان) حلال استخراج کننده (مخلوط شد و به سرعت به درون ‮‭mL ۵‬ محلول آبی ‮‭(۵/۱۱ pH)‬ حاوی ‮‭(w/v) ۱‬ نمک سدیم کلرید تزریق شد .بعد از سانتریفوژ، فاز ته نشین شده حاوی آنالیت های تغلیظ شده برداشته شد و حلال آن تبخیر گردید .باقیمانده در ‮‭L۵۰‬آب اسیدی ( ‮‭(۳ pH‬ حل شد و جهت آنالیز به سیستم تزریق شد .تحت شرایط بهینه، فاکتور تغلیظ و راندمان استخراج ترکیبات مورد بررسی به ترتیب در محدوده‌صی‮‭۴/۴ - ۸/۱۰‬و‮‭۳۳ - ۸۲‬قرار داشتند .روش پیشنهادی در محدوده‌صی غلظتی ‮‭۰۲/۰ -۱ ۱-g mL‬در پلاسما خطی ‮‭(۹۹۷/۰ ۲r)‬ بود .مقادیر ‮‭RSD‬ و خطای نسبی ‮‭(RE)‬ کمتر از ‮‭۲۰‬ است که نشان دهنده دقت و صحت خوب روش است .در نهایت این روش برای آنالیز نمونه های پلاسمای واقعی بدست آمده از بیماران تحت درمان با این داروها به کار گرفته شد .در کار توصیف شده در بخش چهارم، یک روش جدید کروماتوگرافی الکتروسینتیکی مایسلی ‮‭(MEKC)‬ برای آنالیز کارودیلول و پروپرانولول از نمونه‌صی ادرار توسعه و صحه گذاری شد .در این مطالعه، به منظور پاکسازی نمونه بیولوژیک و بهبود حساسیت در‮‭MEKC‬ ، از تلفیق روش استخراج مایع- مایع با نیروی ورتکس ‮‭(VALLE)‬ با روش تزریق نمونه با تقویت میدان- جاروب کردن‮‭Sweeping) - (FASI‬استفاده شد .بعد از ‮‭VALLE‬ ، فاز مستخرجه با روش ‮‭MEKC‬ آنالیز شد .ابتدا لوله‌صی مویین با بافر تریس- فسفات ‮‭(mM ۶۰‬ ، ( ‮‭pH‬ ‮‭۲‬ حاوی ‮‭(v/v) ۴۰‬ متانول پر شد .نمونه ادرار پیش تیمار شده از طریق تزریق الکتروکینتیک ‮‭(s ۲۵۰‬ ، ‮‭kV ۱۰)‬ بارگذاری شد .تمرکز و جداسازی با استفاده از بافر تریس- فسفات ‮‭(mM ۳۰‬ ، ( ‮‭pH‬ ‮‭۳‬ حاوی ‮‭(v/v) ۳۰‬ متانول و ‮‭mM ۵۰‬ از سدیم دودسیل سولفات ‮‭(SDS)‬ در‮‭kV ۲۵‬ - انجام شد و در طول موج های ‮‭۱۹۵‬ و ‮‭۲۱۴‬ نانومتر آشکارسازی شد .روش پیشنهادی در محدوده‌صی ‮‭۰۰۵/۰ -۱ ۱-g mL‬ در ادرار خطی ‮‭(۹۹۷/۰ ۲r)‬ بود .مقادیر ‮‭RSD‬ و ‮‭RE‬ درون روزی و بین روزی روش کمتر از ‮‭۲۰‬ است که نشان دهنده‌صی دقت و صحت خوب روش است .در نهایت این روش برای آنالیز نمونه‌صهای ادرار واقعی بدست آمده از بیماران تحت درمان با این داروها به کار گرفته شد

Part I: A simple and sensitive capillary zone electrophoresis (CZE) method was developed and validated for the analysis of three beta-blockers in human urine. In this study, salting-out assisted liquid-liquid extraction (SALLE) combined with field-ampli?ed sample stacking (FASS) method was employed for biological sample clean-up and sensitivity enhancement in CE. Under the optimal conditions good linearity (r2 ? 0.998) was obtained within 0.025-1 g mL-1 for propranolol and metoprolol and 0.05-1 g mL-1 for carvedilol in urine samples, respectively. Limits of detection (LOD) and lower limits of quantitation (LLOQ) ranged between 0.005 to 0.015 and 0.025 to 0.05 g mL-1, respectively. The relative standard deviations (RSD) of intra and inter-day analysis of examined compounds were less than 10.7 . The recoveries were found in the range of 98 to 119 . The validated method was successfully applied to determine propranolol, metoprolol and carvedilol in human urine samples obtained from the patients whose received these drugs. Part II: A new CZE method was developed and validated for the analysis of four antiarrhythmic drugs in human plasma samples. In this study, a dispersive liquid-liquid microextraction (DLLME) coupled with FASS was employed for biological samples clean-up and sensitivity enhancement in CZE. Under optimum DLLME-FASS-CZE conditions, enhancement factors were in the range of 157-314. The method was validated over the concentration range of 20-800 ng mL-1 in human plasma. Inter- and intra-day precision and the accuracy were less than 20 ; the LODs ranged from 2.5 to 4.7 ng mL-1. Furthermore, the validated method was successfully applied to the detection of studied drugs in patients' plasma samples. Part III: A fast and sensitive high-performance liquid chromatography (HPLC) method with ultraviolet (UV) detection was developed and validated for the simultaneous quantitation of five antiarrhythmic drugs in human plasma samples. It involves DLLME of the desired drugs from 660 L plasma and separation using isocratic elution with UV detection at 200 nm. The complete separation of all analytes was achieved within 7 min. Supernatant phase (as disperser solvent) resulting from the protein precipitation procedure was mixed with 100 L dichloromethane (as an extraction solvent) and rapidly injected into 5mL aqueous solution (pH 11.5) containing 1 (w/v), NaCl. After centrifugation, the sedimented phase containing enriched analytes was collected and evaporated to dryness. The residue was re-dissolved in 50 L de-ionized water (acidified to pH 3) and injected into the HPLC system for analysis. Under the optimal conditions, the enrichment factors and extraction recoveries ranged between 4.4-10.8 and 33-82 , respectively. The suggested method was linear (r2 ?0.997) over a dynamic range of 0.02- 1 g mL-1 in plasma. The intra- and inter-days RSD and relative error (ER) values of the method were below 20 , which shows good precision and accuracy. Finally, this method was applied to the analysis of real plasma samples obtained from the patients treated with these drugs. In the work described in part IV, a new micellar elektrokinetic chromatography (MEKC) method was developed and validated for the analysis of carvedilol and propranolol in human urine samples. In this study, a vortex-assisted liquid-liquid extraction (VALLE) coupled with field-amplified sample injection (FASI) and sweeping was employed for biological samples clean-up and sensitivity enhancement in MEKC. After VALLE, the extractant was analyzed by MEKC method. The Tris-phosphate buffer (60 mM, pH 2) containing 40 methanol was first filled into an uncoated fused-silica capillary. The pretreated urine sample was loaded by electrokinetic injection (10 kV, 250 s). The stacking and separation were performed by using Tris-phosphate buffer (30 mM, pH 3) containing 30 methanol and 50 mM SDS at -25 kV, and detected at 195 and 214 nm. The suggested method was linear (r2 ? 0.997) over a dynamic range of 0.005-1 g mL-1 in urine. The intra- and inter-days RSD and RE values of the method were below 20 , which shows good precision and accuracy. Finally, this method was applied to the analysis of real urine samples obtained from the patients treated with these drugs

فاضلی بختیاری، رعنا

سرورالدین، محمد حسین، استاد راهنما

جویبان، ابوالقاسم، استاد راهنما

فرج زاده، میرعلی

سیاه و سفید

نمایه‌سازی قبلی