عنوان

اثرمحافظتی ژل رویال بر بافت بیضه موش صحرایی تیمار شده با داروی متوتروکسات: ارتباط بین استرس اکسیداتیو و اتوفاژی

پ۲۵۵۴۸

per

اثرمحافظتی ژل رویال بر بافت بیضه موش صحرایی تیمار شده با داروی متوتروکسات: ارتباط بین استرس اکسیداتیو و اتوفاژی

رضا بهادری

دامپزشکی

۱۴۰۰

۸۵ص.

سی دی

دکتری

دکتری دامپزشکی گرايش دامپزشکی

۱۴۰۰/۰۸/۱۹

باروری آینده بیماران سرطان پس از درمان، نگرانی جدی در بین بیماران جوان مبتلا به سرطان است. متوتروکسات آنتاگونیست اسید فولیک است که بطور گسترده¬ای برای مدیریت سرطان نیز مورد استفاده قرارمی¬گیرد. متوتروکسات تعادل اکسیدان وآنتی اکسیدان را برهم میزند که نقش مهم در اسپرماتوژنز وآسیب بافت بیضه دارد. اتوفاژی در حقیقت یک فرایند تکامل یافته به ‌منظور حذف محتویات سلولی که آسیب دیده‌اند، می¬باشد. اساساً، اتوفاژی نقش بسیار مهمی را در فرایند اسپرماتوژنز بر عهده دارد، چراکه در شرایط فیزیولوژیک اتوفاژی با برقراری همئوستازی بافتی روند اسپرماتوژنز را حمایت/تقویت می‌نماید. القاء استرس اکسیدی بر اساس تخلیه گلوتاتیون در شرایط آزمایشگاهی قادر است فرایند اتوفاژی در سلول‌های زایا را بالا ببرد و روند اسپرماتوزنز را دچار اختلال می‌نماید. مطالعات پیشین اثرات محافظتی آنتی اکسیدان¬های مختلف بر روی بافت بیضه موش های صحرایی را اثبات کرده اند. ژل رویال ترشحی از غدد سفالیک زنبور عسل پرستار است. ژل رویال سرشار از ویتامین AوE و همچنین C میباشدکه میتواند فعالیت آنتی اکسیدان آن رابیان کند. مطالعه حاضر اثرات ژل رویال در محافظت از بافت بیضه در مقابل اختلالات ناشی از استرس اکسیداتیو متعاقب درمان با متوتروکسات در رت (ارتباط استرس اکسیداتیو و اتوفاژی) را مورد بررسی قرارداده است. مواد و روش کار: تعداد 26 سر موش صحرایی نر نژاد ویستار به طور تصادفی به چهار گروه مساوی شش تایی 1، 2، 3 و 4 تقسیم شد. گروه 1، گروه کنترل به مدت 35روز نرمالین سالین دریافت کرد، گروه ‌2 ، گروه تک دوز متوتروکسات به مدت 35 روز هر هفته 3 بار به میزان mg/kg 0.3 متوتروکسات به صورت گاواژ دریافت کرد، گروه 3، گروه متوتروکسات به همراه ژل رویال: به مدت 35روز هر هفته به میزانmg/kg 0.3 متوتروکسات به همراه 0.1 میلی گرم هفته¬ای 3بار به ازای هرکیلوگرم وزن بدن ژل رویال به صورت گاواژ دریافت کردند، گروه 4،گروه ژل رویال: به مدت35روزبه میزان گرم0.1 هفتگی 3 بار به ازای هر کیلو گرم وزن بدن ژل رویال بصورت گاواژ دریافت کردند. با رعایت تمامی موارد اخلاقی مربوط به کار با حیوانات آزمایشگاهی پس از 35 روز آسانکشی شدند، متعاقب آن نمونه های بافتی در محلول ثبوتی بوئین فیکس شده و برای ارزیابی هیستوپاتولوژیکی به آزمایشگاه پاتولوژی ارسال شدند. همچنین برای بررسی بیان ژن های هدف (Atg7، Beclin-1، LC3-II) از روش qRT-PCR و بیان ژن LC3-I/II در سلول¬های زایا از روش ایمونوهیستوشیمی استفاده شد. برای تحلیل داده‏ها از نرم‏افزار آماري Spss ورژن 17 استفاده شد. نتایج: یافته¬ها نشان داد در گروه دریافت کننده تک دوز متوتروکسات تغییرات قابل توجه در ساختار بافت بیضه مشاهده گردید، بطوریکه ادم بینابینی شدید، تراکم سلول ها در دیواره لوله های اسپرم ساز کاهش یافته و سلول ها حالت پخش شده و دارای تراکم نامنظمی بودند. همچنین اسپرماتوژنز آسیب شدیدی به همراه داشت. در گروه دریافت کننده متوتروکسات به همراه ژل رویال، کاهش ادم بینابینی و کاهش تراکم سلول های ی زایا در لوله¬های تولید کننده اسپرم همچنین ژل رویال سبب سالم ماندن لوله¬های سمینی-فروس و کاهش پیکنوز و فضای خالی شد. ژل رویال باعث بهبودی قابل توجهی در خصوصیات بافت شناسی لوله¬های منی¬ساز (STs)، قطر لوله¬های منی¬ساز و ضخامت اپیتلیوم منی¬ساز شد. علاوه بر این، درصد بالاتر لوله¬های منی¬ساز (STs) با شاخص های مثبت ایندکس تمایز توبولی (TDI) و ایندکس اسپرمیوژنز (SPI) در گروه تیمار شده با ژل رویال نسبت به گروه متوتروکسات مشاهده گردید. در تجویز هم¬زمان متوتروکسات با ژل رویال، ژل رویال سبب کاهش معنی¬دار (p<0.05) بیان LC3-I/II+ سلول-های زایای (اسپرماتوگونی، اسپرماتوسیت، اسپرماتید) در یک لوله منی¬ساز (ST) شد و بطوریکه در گروه دریافت کننده متوتروکسات افزایش بیان LC3-I/II+ سلول¬های زایا مشاهده گردید. همچنین تجویز ژل رویال بدنبال دریافت متوتروکسات سبب کاهش قابل توجهی (p<0.05) در بیان mRNA کدکننده Beclin-1, Atg7, LC3-I و سطح پروتئینی نسبت به گروه دریافت کننده متوتروکسات شد.

Abstract:The future fertility of cancer patients after treatment is a serious concern among young cancer patients. Methotrexate is a folic acid antagonist that is also widely used in cancer management. Methotrexate upsets the balance of oxidants and antioxidants that play an important role in spermatogenesis and testicular tissue damage. Autophagy is actually an evolved process to remove damaged cell contents. Basically, autophagy plays a very important role in the process of spermatogenesis, because under physiological conditions, autophagy supports / enhances the process of spermatogenesis by establishing tissue homeostasis. Induction of oxidative stress based on glutathione depletion in vitro is able to enhance the process of autophagy in germ cells and disrupt the process of spermatozoon. Previous studies have demonstrated the protective effects of various antioxidants on the testicular tissue of rats. Royal jelly is a secretion from the cephalic glands of the nurse bee. Royal jelly is rich in vitamins A and E as well as C, which can counteract its antioxidant activity. The present study investigated the effects of Royal Jelly in protecting testicular tissue against oxidative stress disorders following methotrexate treatment in rats (association between oxidative stress and autophagy). Materials & Methods: 26 male Wistar rats were randomly divided into four equal groups of 1, 2, 3 and 4. Group 1, control group received normal saline for 35 days, group ،2, group received single dose of methotrexate for 35 days 3 times a week at a dose of 0.3 mg / kg by gavage, group 3, group methotrexate with royal jelly : For 35 days each week at a dose of 0.3 mg / kg methotrexate with 0.1 mg 3 times a week per kilogram of body weight received royal jelly by gavage, group 4, group Royal jelly: for 35 days at a rate of 0.1 g 3 times a week They received royal jelly by gavage per kilogram of body weight. After observing all the ethical issues related to working with laboratory animals, they were relieved after 35 days, after which tissue samples were fixed in Buin's fixation solution and sent to the pathology laboratory for histopathological evaluation. Also qRT-PCR was used to evaluate the expression of target genes (Atg7, Beclin-1, LC3-II) and immunohistochemistry was used to exprss LC3 gene in grem cells. Spss statistical software version 17 was used for data analysis.Results: The results showed that in the group receiving single dose of methotrexate, significant changes were observed in the structure of testicular tissue, so that severe interstitial edema, cell density in the wall of spermatic tubes decreased and cells were diffuse and had an irregular density. Spermatogenesis was also severely damaged. In the group receiving methotrexate along with royal jelly, reduction of interstitial edema and reduction of germ cell density in sperm-producing tubes as well as royal jelly caused seminiferous tubules to remain healthy and reduced pycnosis and empty space. Royal jelly significantly improved the histological characteristics of the seminiferous tubules (STs), the diameter of the seminiferous tubules and the thickness of the seminiferous epithelium. In addition, a higher percentage of meniscus tubes (STs) with positive indices of tubular differentiation index (TDI) and spermiogenesis index (SPI) was observed in the group treated with royal jelly than the methotrexate group. In concomitant administration of methotrexate with royal jelly, royal jelly significantly reduced (p <0.05) the expression of LC3-I / II + germ cells (spermatogonia, spermatocytes, spermatids) in a seminiferous tube (ST) and Increased expression of LC3-I / II + germ cells was observed in methotrexate group. Also, administration of royal jelly after receiving methotrexate caused a significant decrease (p <0.05) in the expression of Beclin-1, Atg7, LC3-I coding mRNA and protein level compared to the methotrexate group.

Protective effect of royal jelly on testicular tissue of rat treated with medicine methotrexate: The relationship between oxidative stress and autophagy

‏بهادری، ‏

رضا ‏

تهيه کننده

‏مرادی ازرلو،‏

‏‏رازی،

‏فیروزامندی،

معصومه ‏

مزدک ‏

معصومه ‏

استاد راهنما

استاد مشاور

استاد مشاور

تبریز