پ۲۶۴۱۸
per
بررسی اثر همزمان سرکوب بیان ژن NANOG و داروی شیمی درمانی در مهار رشد و بنیادینگی رده ی سلولی سرطان معده MKN-45
پریسا واصفی فر
علوم طبیعی
۱۴۰۰
۷۸ص.
سی دی
کارشناسی ارشد
زیست گیاهی
۱۴۰۰/۱۱/۲۳
مقدمه: سرطان معده (GC) پنجمین سرطان رایج و سومین عامل مرگ ناشی از سرطان در سراسر جهان است. بررسی ها نشان داده اند تومورها ناهمگن بوده و از انواع سلول ها تشکیل شده اند که این سلول ها نسبت به شیمی درمانی پاسخ های متفاوتی از خود نشان می دهند. در بین این سلول ها، زیرمجموعه کوچکی از سلول ها با ویژگی های سلول های بنیادی وجود دارد که به درمان مقاوم بوده و مسئول عود و متاستاز بیماری هستند. این سلول ها، سلول های بنیادی سرطان نامیده شده و از طریق نشانگرهای سطحی شناسایی می شوند. فاکتور رونویسی Nanog نقش مهمی در ایجاد مقاومت به درمان، مهاجرت و خود تجدیدشوندگی سلول های بنیادی سرطانی دارد. غیرفعال سازی ژن Nanog با استفاده از siRNA اختصاصی به همراه استفاده از داروی شیمی درمانی می تواند گزینه مناسبی در درمان انواع سرطان ها به ویژه سرطان معده باشد. هدف از این مطالعه بررسی اثر ترکیبی siRNA اختصاصی Nanog و داروی Cisplatin بر روند رشد، مهاجرت، خود تجدید شوندگی و آپوپتوز سلولی در رده سلولی MKN-45 سرطان معده می باشد.مواد و روش ها: به منظور تعیین اثر ترکیبی siRNA اختصاصی Nanog و داروی Cisplatin بر قابلیت زنده ماندن سلول های MKN-45 تست MTT انجام شد. میزان مهاجرت سلول ها به روشWound healing assay، میزان ویژگی خودتجدیدشوندگی سلول ها از طریق تست Colony formation، وضعیت آپوپتوز توسط رنگ آمیزی Annexin V- FITC/PI و میزان بیان نشانگر Nanog به روش فلوسایتومتری بررسی شد. هم چنین میزان بیان ژن MMP2 مرتبط با مهاجرت، ژن MDR1 مرتبط با مقاومت دارویی، ژن های CD44 و Sox-2 مرتبط با کلون زایی و ژن های Caspas 3، Bax و Bcl-2 مرتبط با بنیادینگی با استفاده از qRT- PCR اندازه گیری شد.نتیجه: به دلیل استفاده ترکیبی از siRNA اختصاصی Nanog و داروی Cisplatin، بیان Nanog در سلول های سرطانی MKN-45 کاهش یافت و به دنبال کاهش بیان، افزایش حساسیت سلول ها به داروی شیمی درمانی، کاهش مهاجرت سلول ها، کاهش خود تجدید شوندگی و کاهش تشکیل کلون و در نهایت القای آپوپتوز مشاهده گردید.
Abstract: Gastric cancer (GC) is the fifth most common cancer and the third leading cause of cancer death worldwide. Studies have shown that tumors are heterogeneous and consist of different types of cells that respond differently to chemotherapy. Among these cells, there is a small subset of cells with stem cell characteristics that are resistant to treatment and responsible for disease recurrence and metastasis. These cells are called cancer stem cells and are identified by surface markers. Nanog transcription factor plays an important role in the development of resistance to treatment, migration and self-renewal of cancer stem cells. Inactivation of Nanog gene using specific siRNA along with chemotherapy drug can be a good option in the treatment of various cancers, especially gastric cancer. The aim of this study was to investigate the combined effect of Nanog-specific siRNA and Cisplatin on growth, migration, self-renewal and cell apoptosis in the MKN-45 gastric cancer cell line.Materials and Methods: MTT test was performed to determine the combined effect of Nanog-specific siRNA and Cisplatin on the viability of MKN-45 cells. The rate of cell migration was assessed by Wound healing assay, the rate of cell`s self-renewal characteristic was determined by colony formation test, the state of apoptosis was assessed by Annexin V-FITC / PI staining and the expression of Nanog marker was measured by flow cytometry. Also, the expression of migration-related MMP2 gene, drug resistance-related MDR1 gene, cloning-related CD44 and Sox-2 genes, and the Caspas 3, Bax, and Bcl-2 genes associated with stem cell count were measured using qRT-PCR. Results: Due to the combined use of Nanog-specific siRNA and Cisplatin, Nanog expression decreased in MKN-45 cancer cells, followed by decreasing Nanog expression, increasing cell sensitivity to chemotherapy, decreasing cell migration, decreasing self-renewal and decreasing clone formation and eventually induction of apoptosis were observed.
Investigation of simultaneous effect on suppression of NANOG expression and chemotherapy in inhibiting the growth and stemness of MKN-45 gastric cancer cell line
واصفی فر،
پریسا
تهيه کننده
متفکر آزاد،
برادران،
عاقبتی ملکی،
روح اله
بهزاد
لیلی
استاد راهنما
استاد راهنما
استاد مشاور
تبریز
