۱۲۷۱۸پ
per
میزان زنده مانی و تغییرات فرا ساختاری سلول‌های بنیادی اسپرماتوگونی گوسفند نژاد قزل پس از انجماد در محیط انجمادی حاوی غلظت‌های مختلفFBS
/شیما طریقی
دانشکده دامپزشکی
۱۲۱ص
چاپی
دکترای حرفه‌ای
دامپزشکی
۱۳۹۲/۱۱/۱۲
در مطالعه حاضر، سلول‌های بیضه با استفاده از دو مرحله هضم آنزیمی از بیضه ۴ راس بره حدود ۲ ماهه نژاد قزل استخراج شد .نمونه گیری از بیضه به روش TESE صورت گرفت .پس از تائید شدن ماهیت سلول‌های بنیادی اسپرماتوگونی و سلول‌های سرتولی موجود در سوسپانسیون سلولی حاصل با انجام آزمایش ایمونوسیتوشیمی گیرنده‌هایOct - ۴و PLZF و ویمنتین، این سلول‌ها به مدت ۱۲ روز در شرایط آزمایشگاه کشت داده شده و در قالب سه گروه انجمادی برای مدت ۱ ماه در محیط انجمادی حاوی ماده محافظ کننده در برابر سرمای DMSO و FBS به روش انجماد آهسته در دمای -۱۹۶ درجه سانتی‌گراد و در نیتروژن مایع منجمد گردید .گروه‌های انجمادی ۱ و ۲ و ۳ به ترتیب دارای ۵۰، ۷۰ و ۹۰ درصد FBS بودند .میزان DMSO موجود در تمامی گروه‌ها ۱۰ درصد در نظر گرفته شده بود .سلول‌ها پس از گذشت ۱ ماه با روش ذوب سریع و در حمام آب حدود ۳۷ درجه سانتی‌گراد از انجماد خارج شد .پس از ذوب سلول‌ها درصد زنده‌مانی سلول‌ها به وسیله رنگ آمیزی تریپان بلو مورد ارزیابی قرار گرفته و سپس سلول‌ها تثبیت شده و از نظر میزان آسیب وارده بر سلول‌ها در اثر انجماد، توسط میکروسکوپ الکترونی انتقالی مورد ارزیابی قرار گرفت .نتایج حاصل نشان دهنده کاهش میزان زنده‌مانی سلول‌ها پس از انجماد بود .همچنین در این مطالعه مشاهده شد که افزایش میزان زنده‌مانی سلول‌ها پس از انجماد دارای ارتباط مستقیمی با افزایش میزان FBS موجود در محیط انجمادی می‌باشد) به ترتیب ۱۲/۶۴ ، ۰۳/۶۷ و ۴۱/۷۲ برای قبل از انجماد و گروه‌های۱ ، ۲ و .۳) این در حالی است که در مطالعه مقاطع نیمه نازک رنگ آمیزی شده با تولوئیدن بلو و گریدهای الکترونی تهیه شده با افزودن FBS به میزان ۷۰ در محیط انجمادی، کاهش قابل ملاحظه ای در تغییرات آسیب شناختی مشاهده گردید .لازم به یادآوری است که با افزودن FBS به میزان ۹۰ تغییرات آسیب شناختی شدیدتر از گروه دوم)۷۰ FBS) ولی کمتر از گروه اول) ۵۰ FBS) قابل مشاهده بود
C. After thawing, survival of cells was evaluated by Trypan Blue staining and the cells were fixed and ultrastructural changes of the cells, caused by freezing, were studied by transmission electron microscopy. The results show a decrease in survival rate of the cells after freezing. Also, in this study, the increase in cell survival, after cryopreservation, is associated with amount of FBS in the freezing environment (64. 12, 67. 03 and 72. 41 for groups 1, 2 and 3). Whereas, based on morphological analysis of semi thin and thin sections, only increasing of FBS concentration up to 70 in cryopreservation media leads to impressive decreasing of pathological changes. It is worth noting that the pathological changes observed in third group cells (90 FBS) was severe than second experimental group (70 FBS) but it was mild compared to first experimental group (50 FBS) C. Groups 1, 2 and 3 had 50, 70 and 90 FBS respectively with 10 DMSO in each group. After freezing, cells were rapidly thawed in water bath at about 37196-4, PLZF and vimentin receptors, the cells were cultured for 12 days. The cells were divided in 3 groups and were frozen for one month at the presence of cryoprotective agents DMSO and FBS in liquid nitrogen at -step enzymatic digestion. Testicular biopsy was preformed through TESE procedure. After identification of Spermatogonial and sertoli cells by using Immunocytochemistry tests for Oct-old Ghezel lambs were obtained using two-month-In the present study, testicular cells of the testes of four approximately 2
طریقی، شیما
اشرفی هلان، جواد، استاد راهنما
قاسمی پناهی، بابک، استاد راهنما
مقدم، غلامعلی، استاد مشاور
جعفرزاده، سجاد، استاد مشاور
سیاه و سفید
نمایه‌سازی قبلی
