عنوان

شناسایی و همسانه سازی نواحی جناحین ناقل های پلاستیدی از هویج

‭۱۲۳۳۴پ‬

per

شناسایی و همسانه سازی نواحی جناحین ناقل های پلاستیدی از هویج

/ساناز منتظم

: پردیس بین المللی ارس

‮‭۸۰‬ص‬

چاپی

کارشناسی ارشد

در رشته بیوتکنولوژی کشاورزی

‮‭۱۳۹۲/۰۶/۱۹‬

تبریز

مهندسی ژنتیک پلاستیدی در هویج به منظور تولید فراورده‌صهای جدید در کروموپلاست‌صهای ریشه و بهبود ترکیبات طبیعی موجود در آن اندامک سلولی نیازمند ناقل اختصاصی است .اختصاصی بودن این ناقل مربوط به حضور توالی‌صهای مشابه از ژنوم پلاستیدی هویج در ناقل بوده تا امکان نوترکیبی همتا بین ناقل و ژنوم پلاستیدی فراهم گردد .در این کار تحقیقاتی همسانه‌صسازی نواحی‮‭rrn۵ -rps۷ rrn۲۳-, ndhB‬از پلاستوم هویج در یک ناقل پلاسمیدی مد نظر قرار گرفته شد بطوریکه در ابتدا اطلاعات مربوط به توالی ‮‭DNA‬ پلاستیدی هویج برای تایید مکان مورد نظر جهت ورود ژن‌صهای انتقالی، براساس جهت‌صگیری ژن‌صها در آن ناحیه بررسی شد .سپس از مکان انتخاب شده به کمک نرم افزارهای ‮‭Primer Blast‬ و ‮‭Oligo Analyzer‬اقدام به طراحی آغازگرهای اختصاصی گردید .پس از استخراج ژنوم کل گیاه از ریشه‌صی هویج، واکنش زنجیره‌صای پلی‌صمراز با استفاده از این آغازگرها انجام گرفت .با استفاده از الکتروفورز ژل آگارز قطعه تکثیر یافته، از نظر اندازه تائید شد و سپس در ناقل ‮‭T/A‬ همسانه‌صسازی گردید .جهت تعیین توالی نوکلئوتیدی قطعات همسانه‌صسازی، پلاسمید نوترکیب حاصله به شرکت ژن فناوران ارسال و پس از دریافت نتایج مربوطه از طریق نرم افزارهای ‮‭Blast‬ صحت جناحین همسانه‌صسازی شده، قطعه‌صی‮‭rps۷ - ndhB‬با طول‮‭bp۱۳۹۱‬ و قطعه‌صی‮‭rrn۵ - rrn۲۳‬با طول ‮‭bp ۱۱۹۷‬پس از توالی‌صیابی تایید صگردید

rrn5 fragments was confirmed by nucleotide sequences and the lengths of 1391 bp and 1197 bp respectively-rps7 and rrn23-Blast and Oligo analyzer. After extracting of total cellular DNA from root tissues, the polymerase chain reaction were carried out and obtained results were analyzed by agarose gel electrophoresis to confirm the size of fragments and followed by T/A cloning practices. In order to sequencing of cloned fragments, the recombinant plasmids were sent to Gen Fanavaran company. The results were validated by online software of homology Blast search. Finally the cloning of ndhB-T. So that, the nucleotide sequence of plastome in carrot was assessed to confirm the desired regions used for integration of insert. Then, specific primers from the determined regions were designed using online software of primer-rrn5 fragments were targeted in a plasmid vector named pTG19-rps7 and rrn23-Plastid genetic engineering in carrot needs specific vector in order to produce new products in roots chromoplasts and improve natural component in cell organell. Specificity of this vector is due to the presence of sequence similarity between carrot plastid genome and vector, which is causing homologous recombination amoung them. In this research cloning of ndhB

منتظم، ساناز

باغبان کهنه روز، بهرام، استاد راهنما

نوروزی، مجید، استاد مشاور

سیاه و سفید

نمایه‌سازی قبلی