اثر پیش تیمار۲,۴- Dو نیترات نقره بر ارگانزایی درون شیشهای کلزا Brassica napus))
/اسماعیل بگلری
: دانشکده کشاورزی
۶۱ص
چاپی
کارشناسی ارشد
در رشته بیوتکنولوژی کشاورزی
۱۳۹۲/۰۶/۲۵
تبریز
کلزا از نظر اهمیت سومین گیاه دانه روغنی در جهان محسوب میشود که جزء اولین محصولاتی است که از نظر ژنتیکی مورد دستکاری قرار گرفته است .با توجه به این که دستیابی به یک روش و شرایط باززایی گیاه از کالوس اولین قدم در موفقیت یک برنامه تراریختی است، در این پژوهش عوامل موثر در شاخهزایی مستقیم ارقام کلزا از قبیل ژنوتیپ پیش تیمارD- ۲,۴، استفاده از NAA در قالب آزمایش فاکتوریل با سه عامل با طرح پایه کاملا تصادفی در سه تکرار و هشت نمونه در هر تکرار مورد مطالعه قرار گرفت .بذور در محیط MS به منظور تولید ریزنمونهها کشت شدند .پس از پنچ روز ریز نمونههای کوتیلدون و پس از هشت روز ریز نمونههای هیپوکوتیل برداشت و در محیط کشت MS کشت شدند .نمونهها از هر دو هفته در محیط مشابه واکشت شد و پس از سه ماه ویژگیهایی از قبیل درصد نمونههای باززایی شده و تعداد متوسط شاخساره به ازای هر ریز نمونه یادداشت گردید .دادهها با رعایت مفروضات تجزیه واریانس با استفاده از نرمافزار SPSS مورد تجزیه و تحلیل آماری قرار گرفت .در آزمایش اثر پیشتیمار۲,۴ - Dبههمراه هورمونهای BAP و NAA بر روی باززایی و شاخهزایی، اثر رقم و پیشتیمار۲,۴ - Dدر سطح احتمال ۱ و NAA در سطح احتمال ۵ معنیدار شدند .هیچ یک از اثرهای متقابل در این آزمایش معنیدار نشدند .در بررسی اثر رقم بر روی درصد باززایی و تعداد شاخساره مشخص شد که رقم اورینت بیشترین درصد باززایی را از ریزنمونه کوتیلدون ( (۸۳ و رقم GRS۰۰۳ بیشترین درصد باززایی را از ریزنمونه هیپوکوتیل ( (۷۶ تولید کردند .تعداد شاخساره تولید شده برای هر ریزنمونه نیز در سطح احتمال ۱ معنیدار بود .پیشتیمار یک هفتهای از این هورمون۲,۴ - Dدرصد باززایی و تعداد شاخساره بیشتری تولید کرد .نتایج نشان داد که تیمارهایی که درصد باززایی بالایی داشتند، تعداد شاخساره به ازای ریزنمونه نیز در آنها بیشتر بود .مشخص شد که حضور هورمون NAA بهتر از عدم حضور آن در افزایش درصد باززایی و تعداد شاخساره نقش داشته است .در آزمایش بررسی اثر سطوح مختلف) صفر، ۵/۲ و ۵ میلیگرم در لیتر (نیترات نقره (AgNO۳) بر روی درصد باززایی و شاخهزایی، اثر رقم، AgNO۳ و ریزنمونه در سطح احتمال ۱ و اثر متقابل رقم و ریزنمونه در سطح احتمال ۵ معنیدار شدند .در این آزمایش مشخص شد که سطح ۵/۲ میلیگرم در لیتر AgNO۳ بهتر از دیگر سطوح در افزایش باززایی و شاخهزایی نقش داشت
D pretreatment condition. Presence of NAA in regeneration medium was give good result. In the second experiment use of AgNO3, effect of explant and genotype showed significant effects on in vitro organogenesis. The effects of genotype, AgNO3 and explant significant at 1 and interaction effect of genotype with explant were significant at 5 . Best concentration of AgNO3 was 2.5 mg/L-D pretreatment are significant at 1 and NAA at 5 . In this experiment there was no interaction effect between investigated factors. Investigation of genotype effect on regeneration percent and amount of shoot indicated that Orient have highest percent of regeneration from cotyledon explants (75 ) and RGS003 have highest regeneration percent (68 ) from hypocotyl explants. Effect of treatment on number of shoot per explant was significant at 1 level. The results showed that treatment whit high good regeneration has high number of shoot per explant. The high shoot regeneration percent and number of shoot in explant produced in a week 2,4-D pretreatment and presence of NAA in organogenesis medium investigated in a factorial experiment whit complemented randomized design whit three repeat. Cotyledon and hypocotyl explants harvested and were culture on MS medium after five and eight days respectively. Explants were subculture in new medium after two weeks and some properties including regenerated explant and number of shoots per explant. Data was analyzed by SPSS software. Analysis of variance showed that effect of genotype and 2,4-Canola (Brassica napus) is the 3th most important oil seed plant in the world and was considered for genetic modification in opening of this technology. Optimization of a reliable protocol for in vitro regeneration of Canola is the first step in plant transformation. In this study the effect of different factors including genotype, 2,4