۱۱۰۷۹پ
per
تثبیت آنزیم رودنیز کبد گاوی بر روی بستر MnO۲ نانوحفره جهت اندازه گیری سیانید
/افشین رحمان پور
: دانشکده دامپزشکی
۶۱ص
چاپی
دکترای حرفه ای
در رشته ی دامپزشکی
۱۳۹۲/۰۶/۲۵
تبریز
ورود مواد سیانوژنیک در چرخه غذایی یکی از مباحث مهم در امنیت غدایی می باشد این مسئله ضرورت استفاده از مواد مختلف به عنوان بیوسنسور را آشکار می سازد.آنزیم رودنیز یکی از آنزیم های مهم در سم زدایی یون سیانید محسوب می شود.برای تولید بیوسنسور سیانیدابتدا باید آنزیم رودنیز تثبیت گردد.به طور کلی تثبیت آنزیم ها به روش های مختلفی انجام می گیرد که یکی از این روش ها تثبیت به روش جذب سطحی است.در این تحقیق آنزیم رودنیز کبد گاوی بر روی بستر نانو حفره MnO۲ به روش جذب سطحی تثبیت و خصوصیات آن با آنزیم در حالت آزاد مقایسه شد.نتایج این مطالعه نشان می دهد که pH بهینه جهت فعالیت آنزیم رودنیز هم در حالت آزادو هم در حالت تثبیت شده برابر با ۸می باشد، همچنین دمای بهینه فعالیت آنزیم رودنیز در حالت آزادوتثبیت شده دمای ۴۰ درجه سانتیگراد بدست آمد .بررسی پارامتر های سینتیکی آنزیم رودنیز در حالت آزاد نشان داد که Km و Vmax آنزیم برای سوبسترای سیانید پتاسیم برابربا ۲۵/۳ و ۱۱/۶ و برای سوبسترای تیوسولفات ۷۹/۵ و ۷۵/۷ می باشد .بررسی پایداری آنزیم در دمای ۸۵ درجه سانتیگراد نشان داد که پس از ۱۰ دقیقه انکوباسیون میزان فعالیت آن ۶۹ درصد فعالیت کنترل می باشد .بررسی میزان تکرار پذیری قابل استفاده بودن آنزیم تثبیت شده نشان داد که آنزیم تثبیت شده بر روی نانو حفره MnO۲ پس از ۴ بار شستشو دارای کاهش فعالیتی در حدود ۹۰ درصد کنترل می باشد
C. Evaluation of reproducibility of immobilized enzyme showed that, after 4 times washing, activity decreased by 90 of the controlC. The Km and Vmax values for KCN and Na2S2O3 as substrates were 3.25 mM, 6.11 unit/mg protein and 5.79 mM, 7.75 unit/mg protein, respectively. The enzyme was heat stable, losing about 31 of relative activity after only 10 min of incubation at 85Cyanide is one of the most toxic substances present in a wide variety of food materials that are consumed by animals. Biosensors are necessary for detection of cyanide ions. Rhodanese, a ubiquitous enzyme, can catalyze the detoxification of cyanide by sulphuration reaction. For production of cyanide biosensor, enzyme must first be immobilized. In general, different methods are used for immobilization of enzymes. Physical adsorption is one of these methods. In this study, rhodanese was immobilized on nanoparous MnO2 with physical adsorption method and compared with enzyme at Free State. Results show that, enzyme at free and immobilized forms have optimal activity at pH 8, and the temperature optimum at 40
رحمان پور، افشین
طایفی نصرآبادی، حسین، استاد راهنما
کریمی، افضل، استاد مشاور
سیاه و سفید
نمایه‌سازی قبلی
