عنوان

ارزیابی اثر پروتئین لاکتوفرین خالص‌شده از آغوز (کلستروم) شیر گاو بر زنده مانی تاکی زوئیت های توکسوپلاسما گوندی

پ۲۵۴۴۹

per

ارزیابی اثر پروتئین لاکتوفرین خالص‌شده از آغوز (کلستروم) شیر گاو بر زنده مانی تاکی زوئیت های توکسوپلاسما گوندی

علی مهدوی‌راد

دامپزشکی

۱۴۰۰

۶۹ص.

سی دی

کارشناسی ارشد

بهداشت و کنترل کیفی مواد غذایی

۱۴۰۰/۰۸/۱۱

چکیدهتوکسوپلاسـما گونـدي عامل ایجادکننده بیماری توکسوپلاسموزیس، یک انگل اجباری داخل سلولی حیوانات خونگرم است که میزبان نهایی آن گربه و گربه¬سانان می‌باشد. انتقال این انگل در میزبان‌های واسط علفخوار از طریق آب و علوفه‌های آلوده به اووسیست انگل و در گربه و انسان از طریق خوردن گوشت و شیر آلوده به کیست، تاکی زوئیت و اووسیست انگل صورت می‌گیرد. ازآنجایی‌که برخی از افراد، شیر حیوانات را به‌صورت خام مصرف کرده و یا در دمای مطلوبی که به مرگ میکروارگانیسم‌های مضر منجر شوند، حرارت نمی‌دهند بنابراین زنده‌مانی تاکی‌زوئیت‌های توکسوپلاسما گوندی در شیر این حیوانات به‌عنوان ریسک فاکتور مهمی در انتقال آلودگی به انسان محسوب می‌شود. هدف از این مطالعه ارزیابی اثر پروتئین لاکتوفرین خالص‌شده از آغوز (کلستروم) شیر گاو بر زنده‌مانی تاکی‌زوئیت‌های توکسوپلاسما گوندی می‌باشد. برای این منظور لاکتوفرین را به‌صورت تجاری از شرکت دانش‌پژوهان شیمی (محصول شرکت سیگما آلدریچ) تهیه کرده، سپس غلظت‌های مختلف لاکتوفرین شامل 50، 100، 200, 400 میکروگرم بر میلی‌لیتر را به محیط کشت RPMI 1640 حاوی 107×5 تاکی‌زوئیت‌های توکسوپلاسما گوندی سویه RH اضافه و در مدت‌زمان‌های 24، 48، 72 و 96 ساعت انکوبه کردیم. بعد از مدت‌زمان‌های تیمار، آن‌ها را به مدت 5 دقیقه با دور 2000 سانتریفیوژ و رسوب حاصل را به موش‌ها تزریق کردیم. هریک از غلظت‌ها در هریک از مدت‌زمان مشخص با دو بار تکرار انجام شد. جهت ارزیابی میزان مرگ‌ومیر تاکی‌زوئیت‌های توکسوپلاسما گوندی در هریک از غلظت‌های لاکتوفرین در زمان‌های مشخص با دو بار تکرار محیط کشت حاوی لاکتوفرین آلوده به انگل توکسوپلاسما به سه سر موش به‌صورت داخل صفاقی تزریق شد. سپس زنده‌بودن انگل از طریق مرگ‌ومیر موش‌ها بررسی گردید. داده‌های حاصل با روش آنالیز واریانس یک‌طرفه (ANOVA) مورد تجزیه‌وتحلیل آماری قرار گرفت و در صورت معنی‌دار شدن اختلاف میانگین‌ها (P< 0.05) از آزمون تعقیبی دانکن جهت پیگیری اختلاف بین گروه‌ها استفاده گردید. آنالیز داده‌ها با استفاده از نرم‌افزار SPSS نسخه 21 انجام شد. نتایج مطالعات نشان داد که بعد از 24 و 48 ساعت تیمار موش‌های سوری با غلظت 50، 100 و 200 میکروگرم بر میلی‌لیتر لاکتوفرین آلوده‌شده با انگل توکسوپلاسما گوندی، باعث مرگ‌موش‌ها شد ولی غلظت 400 میکروگرم بر میلی‌لیتر لاکتوفرین بعد از 72 و 96 ساعت باعث مرگ تاکی‌زوئیت‌های انگل و درنتیجه منجر به زنده‌مانی موش‌ها گردید. مقایسه میانگین مرگ‌ومیر موش‌ها در بین دو گروه با استفاده از آنالیز آماری دانکن نشان داد که بین مدت‌زمان 24 ساعت و 96 ساعت ارتباط معنی‌داری وجود داشته ولی بین زمان‌های 24 ساعت با 72 ساعت و 72 ساعت با 96 ساعت ارتباط معنی‌داری مشاهده نگردیده است. نتایج این مطالعه نشان داد که مؤثرترین غلظت لاکتوفرین که باعث مرگ تاکی‌زوئیت‌های انگل و درنتیجه باعث زنده‌مانی موش‌ها گردیده بود، غلظت 400 میکروگرم بر میلی‌لیتر لاکتوفرین بعد از 96 ساعت بود.

AbstractToxoplasma gondii is the causative agent of Toxoplasmosis, a forced intracellular parasite of warm-blooded animals that is the ultimate host of cats and felines. Transmission of this parasite in herbivorous intermediate hosts occurs through water and forages contaminated with parasite oocysts and in cats and humans through eating meat and milk contaminated with cysts, tachyzoite and parasite oocysts. Because some people consume raw animal milk or do not heat it to the desired temperature, which leads to the death of harmful microorganisms, the survival of Toxoplasma gondii tachyzoites in the milk of these animals is an important risk factor for transmission to humans. The aim of this study was to evaluate the effect of lactoferrin protein purified from colostrum of cow's milk on the survival of Toxoplasma gondii tachyzoites. For this purpose, lactoferrin is commercially prepared from Daneshpajohan Shimi Company (product of Sigma Aldrich Company), then different concentrations of lactoferrin including 50, 100, 200, 400 micrograms per milliliter are added to RPMI 1640 culture medium containing 107 × 5 tachyozoites. Toxoplasma gondii were added to the RH strain and incubated for 24, 48, 72 and 96 hours. After treatment periods, we injected them into mice for 5 minutes at 2000 rpm and the resulting precipitate. Each concentration was repeated twice at any given time. To evaluate the mortality of Toxoplasma gondii tachyzoites in each of the lactoferrin concentrations at specific times with two repetitions of culture medium containing lactoferrin infected with Toxoplasma gondii, three rats were injected intraperitoneally. The parasite survival was then assessed by mouse mortality. The data were analyzed by one-way analysis of variance (ANOVA) and if the mean difference (P <0.05) was significant, Duncan post hoc test was used to follow the difference between the groups. Data analysis was performed using SPSS software version 21. The results showed that after 24 and 48 hours of treatment of mice with concentrations of 50, 100 and 200 μg / ml lactoferrin infected with Toxoplasma gondii, caused the death of mice, but the concentration of 400 μg / ml lactoferrin after 72 And 96 hours caused the death of parasitic tachyzoites, resulting in survival of mice. Comparison of the mean mortality of mice between the two groups using Duncan statistical analysis showed that there was a significant relationship between 24 hours and 96 hours, but between 24 hours with 72 hours and 72 hours with 96 hours. Dari has not been observed. The results of this study showed that the most effective concentration of lactoferrin, which caused the death of parasitic tachyzoites and thus caused mice to mite, was a concentration of 400 μg / ml lactoferrin after 72 hours.

Evaluation the effect of lactoferrin purified from bovine milk colostrum on survival of Toxoplasma gondii tachyzoites

‏مهدوی‌راد،

‏ علی

تهيه کننده

‏موسوی،

‏حاجی‌پور،

میرحسن

‏ ناصر

استاد راهنما

استاد راهنما

‏ تبریز