۳۹۸۵پ
per
تهیه آنزیم کبدی آلدهید اکسیداز و مطالعه برهمکنش آن با فلاونوئیدها توسط روش‌های Modeling& QSAR
/سیف الله رحمانی
: دانشکده علوم طبیعی
، ۱۳۹۰
۱۰۵ص
چاپی
کارشناسی ارشد
زیست شناسی - بیوشیمی
۱۳۹۰/۰۶/۲۰
دانشگاه تبریز
فلاونوئیدها به گروهی از مواد پلی فنلی اطلاق می‌شود که به طور عمده در میوه‌جات و سبزیجات یافت شده و علاوه بر اینکه دارای ویژگی آنتی اکسیدانی بالقوه‌ای می‌باشد، قادرند فعالیت بسیاری از آنزیم‌های متابولیک را مهار سازند .از جمله آنزیم‌هایی که تحت تأثیر فعالیت مهاری فلاونوئیدها قرار می‌گیرند، آلدهید اکسیداز (AO) از گروه مولیبدنوم هیدروکسیلازها می‌باشد که در تولید رادیکال‌های اکسیژنی (ROS) و متابولیسم بسیاری از داروها و گزنوبیوتیک‌ها نقش مهمی دارد .آنزیم گزانتین اکسیداز (XO) از نظر عملکرد مشابه AO بوده و این آنزیم در تولید اسید اوریک و ROS در طی فرآیند ایسکمی ریپرفیوژن نقش فعالی را دارد .هدف از مطالعه حاضر، بررسی in vitro اثر مهاری فلاونوئیدها بر روی فعالیت آلدهید اکسیداز کبدی و مطالعه برهمکنش برخی فلاونوئیدها با این آنزیم با روش‌های مدل سازی و QSAR می‌باشد .فراکسیون حاوی AO و XO از کبد موش صحرایی نر بالغ، به روش حرارتی و ترسیب با سولفات آمونیوم از کبد هموژنیزه تهیه گردید .اثرات ۱۵ فلاونوئید از زیر دسته‌های فلاونول، فلاوانول، فلاوانون و ایزوفلاون بر روی اکسیداسیون فنانتریدین و وانیلین به عنوان سوبسترای آلدهیداکسیداز و گزانتین به عنوان سوبسترای گزانتین اکسیداز توسط اسپکتروسکوپی مرئی-فرابنفش بررسی شد و نتایج حاصله از اثر مهاری این ترکیبات طبیعی بر روی AO و XOبا اثر مهاری منادیون( مهار کننده (AO و آلوپورینول( مهار کننده (XO مقایسه شدند .مطالعات آنزیمی توسط روش اسپکتروفوتومتری UV صورت پذیرفت .از میان این ۱۵ فلاونوئید، میرسیتین و کرسیتین قوی‌ترین مهار کننده های آلدهیداکسیداز و گزانتین اکسیداز بودند .بررسی کینتیکی نشان داد که کرسیتین با مهار مختلط موجب مهارAO ۸۵)/۱= (Ki و XO (Ki=۰/۸۲) گردید .نارینجین توانایی مهار پایینی را بر روی فعالیت AO و XO از خود نشان داد .در نتیجه فلاونوئیدهای بدون نیمه قندی در مقایسه با فلاونوئیدهای حاوی قند اثر مهاری معنی دارتری را بر روی فعالیت AO و XO را نشان دادند که می‌توان این اثر را به ممانعت فضایی ایجاد شده توسط نیمه قندی برای قرار گیری فلاونوئید در جایگاه فعال نسبت داد و همچنین فلاونوئیدها هر دو آنزیم AO و XO را تقریبا با الگوی مشابهی مهار نمودند .مطالعه QSAR و Modeling نیز نشان داد که مهمترین فاکتور در تعیین قدرت مهار فلاونوئیدها اندازه آنها می‌باشد .فاکتور مهم دیگر وجود گروه‌های کتونی بود که با افزایش آن میزان مهار نیز افزایش می‌یافت .همچنین موقعیت گروه‌های هیدروکسیل بر روی حلقه B عامل مهم دیگر در میزان مهار است
Flavonoids are a group of polyphenolic substances which are found mainly in fruits and vegetables and In addition to their antioxidant properties, they are potentially able to inhibit the formation of many metabolic enzymes. Inhibitory activity of flavonoids, includes enzymes like aldehyde oxidase (AO) of the molybdenum hydroxylase that generates oxygen radicals (ROS) and has an important role in metabolism of many drugs and xenobiotic. xanthine oxidase (XO) has an active role in the production of uric acid and ROS during ischemia reperfusion. The aim of this study is to investigate the in vitro inhibitory effect on liver aldehyde oxidase activity and study the interaction of flavonoids with this enzyme by modeling and QSAR methods. Partially purified AO and XO were prepared from liver homogenates of mature male rat by heat treatment and ammonium sulphate precipitation. The effect of 15 flavoniods from four group including flavonol, flavanol, flavanon and isoflavon on oxidation of phenanthe ridine and vanillin as substrates of AO and xanthine as substrate of XO were investigated and the results were compared with the inhibitory effects of menandion (AO specific inhibitor) and allopurinol (XO specific inhibitor) on AO and XO activities using UV spectrometric methods. Among this flavonoids, myercitin and quercetin were strongest inhibitor of AO and XO. Kinetic studies showed that quercetin exert its effect through mixed inhibition on AO (Ki= 1/85) and XO (Ki=0/82). Naringine had a low inhibitory effect on AO and XO. As conclusions, the inhibitory effects of aglycone flavonoids on AO and XO activities are more significant than other flavonids. This effect can be attributed to creating Space prohibits in active site by half sugar and flavonoids can also inhibit both enzymes in an almost same manner. QSAR and Modeling study also showed that the most important factor in determining inhibition was flavonoids size. Another important factor was the presence of ketone groups also increased with increasing the degree of inhibition. The position of hydroxyl groups on ring B is an important factor in the degree of inhibition Key words: Aldehyde Oxidase, Xanthine Oxidase, flavonoids, IC50, QSAR, Modeling
Aldehyde Oxidase
Xanthine Oxidase
Flavonoids
IC50
QSAR
رحمانی،سیف الله
حسینپور فیضی، محمدعلی، استاد راهنما
دهقان، غلامرضا، استاد راهنما
رشیدی، محمدرضا، استاد مشاور
جویبان، ابوالقاسم، استاد مشاور
سیاه و سفید
نمایه‌سازی قبلی
