عنوان

بررسی اثرات مهار ژن نوکلئوستمین بر رشد و مرگ رده سلولی لوسمی میلوئید مزمن انسان

‭۳۹۸۲پ‬

per

بررسی اثرات مهار ژن نوکلئوستمین بر رشد و مرگ رده سلولی لوسمی میلوئید مزمن انسان

/نگین سیدگوگانی

: دانشکده علوم طبیعی

، ‮‭۱۳۸۹‬

‮‭۱۱۴‬ص‬

چاپی

کارشناسی ارشد

زیست شناسی - بیوشیمی

‮‭۱۳۸۹/۱۱/۲۵‬

دانشگاه تبریز

لوسمی میلوئیدی مزمن یکی از بیماری های خونی می باشد که در اثر تکثیر بی رویه سلول های بنیادی خون ساز ایجاد می شود .نوکلئوستمین نقش عمده ای در کنترل رشد و خودنوزایی سلول های بنیادی و سرطانی ایفا می کند .بنابراین مهار بیان ژن نوکلئوستمین می تواند به عنوان عامل بالقوه در درمان سرطان محسوب شود .در مطالعه ی حاضر، اثرات سرکوب بیان ژن نوکلئوستمین در رده سلولی ‮‭K۵۶۲‬ مورد بررسی قرار گرفته است .در این مطالعه، پس از تیمار سلول های ‮‭K۵۶۲‬ با ‮‭siRNA‬ اختصاصی نوکلئوستمین، تغییر در الگوی بیان نوکلئوستمین با واکنش رونویسی معکوس نیمه کمی‮‭PCR) -(RT‬بررسی گردید .آزمون دفع رنگ تریپان بلو، آزمون جذب نمک تترازولیوم ‮‭(MTT)‬ و میکروسکوپ فلورسنت به ترتیب به منظور بررسی مهار رشد و مرگ سلولی سلول های ‮‭K۵۶۲‬ بکار گرفته شد .از فلوسایتومتری برای بررسی اثرات مهار ژن نوکلئوستمین بر چرخه ی سلولی استفاده گردید .مطالعه ی ما نشان داد که ژن نوکلئوستمین بیان بالایی در سلول های ‮‭K۵۶۲‬ دارد .تیمار سلول های ‮‭K۵۶۲‬ با ‮‭siRNA‬اختصاصی نوکلئوستمین در غلظت ‮‭۲۰۰‬ نانومولار پس از ‮‭۴۸‬ ساعت، سطح ‮‭mRNA‬ نوکلئوستمین را در مقایسه با سلول های کنترل به میزان ‮‭۵۵‬ مهار کرد ‮‭۴۸‬ .ساعت پس از ترانسفکشن، رشد سلول ها به میزان ‮‭۷/۳۳‬ کاهش یافت .هم چنین مهار بیان ژن نوکلئوستمین منجر به مهار چرخه ی سلولی در مرحله ی ‮‭G۱‬ شد .نتایج حاصل از میکروسکوپ فلوروسنت نشان داد که آپوپتوز، ‮‭۴۸‬ ساعت پس از خاموشی بیان ژن نوکلئوستمین رخ می دهد .به نظر می رسد وقوع آپوپتوز پس از مهار چرخه ی سلولی در مرحله‮‭G۱‬ ، مکانیسم اثر مهار نوکلئوستمین در سلول های ‮‭K۵۶۲‬ باشد .با توجه به اثرات قوی مهار رشدی و آپوپتوزی ‮‭siRNA‬ نوکلئوستمین در سلول های ‮‭K۵۶۲‬لوسمی میلوئید انسانی، خاموشی بیان این ژن می تواند به عنوان یک هدف بالقوه در مهار سلول های‮‭K۵۶۲‬ ، به عنوان مدل سلول بنیادی لوسمی میلوئیدی مزمن، باشد

Chronic myeloid leukemia (CML) is a malignant hematopoietic disorder that causes by indefinite proliferation of leukemia stem cells. Nucleostemin plays a critical role in control of proliferation and self renewal of stem cells and cancer cells. Thus, inhibition of nucleostemin expression could be a potent therapeutic approach in cancer treatment. In the present study, the effect of nucleostemin gene silencing in K562 cell line has been studied. In this study, after transfecting nucleostemin specific siRNA into K562 cells, changes in nucleostemin gene expression pattern were determined by semi-quantitative reverse transcription polymerase chain reaction (RT-PCR). Trypan blue exclusion test, MTT assay and Fluorescent microscopy were used to evaluate growth inhibition and apoptosis of K562 cells, respectively. Flow-cytometery was utilized for evaluating the effects of nucleostemin gene silencing on cell cycle. Our findings showed that nucleostemin gene was highly expressed in K562 cells. NS-siRNA transfection into K562 cells at 200 nM inhibited nucleostemin mRNA level up to 55 after 48 h when compared to corresponding control cells. Forty eight hours after transfection, the cell growth was decreased 33.7 . In addition, the silencing of nucleostemin induced G1 cell cycle arrest. Furthermore, fluorescent microscopy assays indicated that apoptosis was occurred 48 h after silencing of nucleostemin gene. It seems that post G1- arrest apoptosis, is main mechanism of nucleostemin knockdown in K562 cells. Attain to potent growth inhibitory and apoptotic effects of nucleostemin siRNA in human myeloid leukemia K562 cells, the silencing of this gene can be a potent target to inhibiting K562 cells as stem cell model of chronic myeloid leukemia

Apoptosis

Chronic myeloid leukemia

K562 cell line

Nucleostemin

RNAi

سیدگوگانی، نگین

موسوی، سیدمحمدامین، استاد راهنما

اسدی، مسعود، استادمشاور

سیاه و سفید

نمایه‌سازی قبلی