۳۹۶۰پ
per
سنجش فعالیت آنزیم کیتیناز Cدر باکتریهای گونه ی استرپتومایسس برای بهینه سازی تولید آن به عنوان عوامل کنترل زیستی
/شبنم کمالی
: دانشکده علوم طبیعی
، ۱۳۹۰
۷۸ص
چاپی
کارشناسی ارشد
زیست شناسی- بیوشیمی
۱۳۹۰/۰۶/۲۵
دانشگاه تبریز
کنترل بیولوژیکی به عنوان راه‌کاری که می‌تواند جهت مقابله با پاتوژن‌های قارچی گیاهان، جایگزین استفاده از سموم شیمیایی گردد، توسعه یافته است .با توجه به وجود درصد بالایی از کیتین در دیواره‌صی سلولی قارچها، آنزیم های کیتیناز به عنوان یک عامل کنترل کننده‌ص ی زیستی موثر بر علیه قارچهای بیماریزای گیاهی محسوب می‌گردند .کیتینازها آنزیمهای گلیکوزید هیدرولازی هستند که هیدرولیز کیتین را بر عهده دارند .باکتریهای استرپتومایسس قادر به تولید انواع مختلف آنزیمهای کیتیناز می باشند .کیتینازهای تولیدی استرپتومایسس‌ها به دو خانواده ۱۸ و ۱۹ گلیکوزیل هیدرولازها تعلق دارند .معمولا فعالیت ضدقارچی را کیتینازهای خانواده ۱۹ نشان می‌دهند و در مقایسه با کیتینازهای باکتریایی خانواده۱۸ ، فعالیت هیدرولیز کننده ویژه ی کیتیناز C که یک کیتیناز خانواد ۱۹ می باشد، در برابر هر دو نوع کیتین محلول و غیرمحلول به طور قابل ملاحظه‌ای بالاتر بوده است .با توجه به اهمیت کیتینازهای خانواده ۱۹ در دفاع ضدقارچی، در مطالعه حاضر، سعی بر این بوده است تا پتانسیل ضد قارچی باکتریهای استرپتومایسس جدا شده از خاک مناطق اردبیل و کردستان با تکیه بر شناسایی مولکولی ژن کیتیناز خانواده ۱۹ و سنجش آنزیمی در این باکتری‌ها مورد بررسی قرار گیرد .به دنبال ایزولاسیون ۱۷۱ باکتری و استخراجDNA ، جهت تکثیر ژن کد کننده آنزیم کیتیناز۱۹ ، PCR انجام گرفت .از میان ۱۷ ایزوله‌ای که نتیجه مثبت نشان دادند) کردستان ۷ :ایزوله، اردبیل ۱۰ :ایزوله(، یکی به تصادف انتخاب شد .این ایزوله از خاک منطقه دیوان دره کردستان جداسازی شده بود .باکتری انتخاب شده در محیط حاوی کیتین به عنوان تنها منبع کربن کشت داده شد تا ژن کیتیناز در آن روشن گردد و آنزیم در محیط آزاد گردد، عصاره ی آنزیمی از محیط کشت باکتری در هر روز به مدت ۸ روزگرفته شد و فعالیت آن سنجیده شد آنزیم بعد از گذشت ۵ روز از کشت بیشترین فعالیت را از خود نشان داد و سپس فعالیت آن درpH صها و دماهای مختلف سنجیده شد .آنزیم در ۶=pH و دمای ۳۷ C بهترین فعالیت را از خود نشان داد .آزمایشات بر رو روی یک نمونه از باکتری استرپتومیسس گریزئوس خریداری شده از مرکز کلکسیون قارچها و باکتری های صنعتی ایران نیز به عنوان کنترل انجام گرفت و نتایج مشابه با سویه انتخاب شده نشان داد .اثرات ضد قارچی نمونه انتخاب شده بر روی قارچهای پاتوژن با کشت دوگانه قارچ و باکتری بر روی محیط PDA مورد بررسی قرار گرفت .باکتری مانع رشد قارچ بر روی محیط کشت اختصاصی شد
Biological control has been developed as an alternative of chemicals to tackle with plant pathogenic fungi. Considering high presence of chitin in fungal cell wall, chitinase enzyme is counted as an effective biocontrol agent against phytopathogenic fungi. Chitinases are enzymes which hydrolyze chitin, a polymer of ?-1,4-N-acetylglucosamine. Streptomyces bacteria are able to produce various chitinase enzymes. Chitinases produced by Strptomyces belong to the families 18 and 19 of glycosyl hydrolases. The antifungal activity is mostly shown by family 19 chitinases. In comparison with bacterial family 18 chitinases, the specific hydrolyzing activity of chitinase C (a family 19 chitinase) against soluble and insoluble chitinous substrates has been markedly higher. Considering the importance of family 19 chitinases in antifungal defense, in this study we tried to investigate antifungal potential of Streptomyces bacteria isolated from Ardebil and Kurdestan region soils, based on molecular identification of family 19 chitinase encoding gene and enzyme assay in these bacteria. Following the isolation of 171 bacteria and DNA extraction, PCR was performed in order to amplify family 19 chitinase encoding gene. One of 17 chitinase positive isolates (Kurdestan: 7 isolates, Ardebil: 10 isolates) was randomly selected. It was isolated from Kurdestan soil. The selected bacteria was cultured in medium containing chitin as the sole carbon source to turn on the genes and enzymes chitinase be released in the environment, For every day intervals up to 8 day, a culture filtrate was collected and used as an enzyme source and Its activity was measured. The highest enzyme activity, was observed after 5 days of culture. And its activity was measured at various temperatures and pH. Optimum pH and temperature for enzyme activity were pH=6 and temperature of 37 ?C. In addition, a sample of purchased Streptomyces griseus was used as control. In the dual culture test on PDA medium, an inhibitory effect of growing Streptomyces griseus against growth of pathogenic fungal strains was observed.
Streptomyces
Anti- fungal effect
Biological control
Fmily 19 Chitinase
کمالی، شبنم
امین موسوی، سید محمد، استاد راهنما
دهناد، علیرضا، استاد راهنما
سیاه و سفید
نمایه‌سازی قبلی
