عنوان

مطالعه موتاسیون های موجود در اگزون شماره یک از ژن ‮‭p۵۳‬ در تومورهای بافت پستان سگ به روش واکنش زنجیره ای پلی مراز و تعیین توالی

‭۴۴۷۱پ‬

per

مطالعه موتاسیون های موجود در اگزون شماره یک از ژن ‮‭p۵۳‬ در تومورهای بافت پستان سگ به روش واکنش زنجیره ای پلی مراز و تعیین توالی

/ندا زابلی رود

تبریز : دانشگاه تبریز ، دانشکده دامپزشکی

‮‭۱۰۷‬ ص‬

چاپی

کارشناسی ارشد

علوم درمانگاهی

‮‭۱۳۹۱/۰۶/۱۱‬

تبریز : دانشگاه تبریز ، دانشکده دامپزشکی

سرطان در سگ‌ها به طور معمول رخ می دهد و نیازمند توجه فوری و قاطع دامپزشک می باشد .بدلیل پیشرفت در بهبود مراقبت‌صهای دامپزشکی، سگ‌ها تا سنین بالا زندگی می‌کنند که باعث شیوع بالای انواع سرطان‌ها در این زمان می‌شود .امروزه سرطان علت بیماری‌های منجر به مرگ در سگ‌ها به شمار می‌رود و به همین ترتیب اهمیت زیادی دربین صاحبان دام بدست آورده است .فاکتورهای محیطی و ژنتیکی) آلودگی هوا، آلودگی آب، عوامل عفونی و پرتوهای یونیزه و غیریونیزه و بویژه هورمون‌ها و داروها، خطرات شغلی و فاکتورهای خطرساز مربوط به زندگی مثل رژیم غذایی (تاثیر زیادی برروی وقوع سرطان دارند .بنابراین امروزه تاکید زیادی برروی توسعه تحقیقات درباره فاکتورهای ژنتیکی و محیطی است که در سرطان‌های سگ‌سانان بویژه در تغییرات سلولی و مولکولی تاثیر دارند .تومورهای پستان سگ‌صسانان نصف تومورهای سگ‌های ماده را شامل می شود که بیش از‮‭۴۰ - ۵۰‬از آنها به صورت بدخیم رخ می‌دهد، هدف از اجرای این پژوهش بررسی میزان موتاسیون‌های رخ داده در اگزون شماره یک از ژن‮‭p۵۳‬ در تومورهای بافت پستان سگ به روش واکنش زنجیره‌ای پلی‌مراز ‮‭(PCR)‬و تعیین توالی آنها بود .بمنظور اجرای این تحقیق، تعداد ‮‭۲۶‬ نمونه بلوک پارافینه شده بافت تومور پستانی مربوط به آرشیو بخش پاتولوژی دانشکده دامپزشکی تبریز، مورد استفاده قرار گرفت .لام‌های تهیه شده از بلوک‌صهای پارافینه، به وسیله میکروسکوپ نوری‮‭CH۳۰ (- OLYMPUS‬ساخت ژاپن(، مربوط به بخش پاتولوژی دانشکده دامپزشکی تبریز، به منظور تایید وجود تومور و تشخیص نوع تومور، مورد مشاهده قرار گرفتند و تصاویر مربوط به لام‌ها، بوسیله دوربین‮‭۲(Japan) -TVO.۵XC- OLYMPUS DP۱۲,U‬تهیه شد .سپس برش و استخراج ‮‭DNA‬ به ‮‭۲‬ روش جوشاندن و استفاده از کیت ژل سیلیکا انجام و پس از ارزیابی غلظت ‮‭DNA‬ موجود، با روش ‮‭PCR‬ و تعیین توالی ‮‭DNA‬ صورت گرفت .پس از تکثیر بخشی از ژن‮‭p۵۳‬ ، محصول واکنش زنجیره‌ای پلیمراز، تعیین توالی شد .این محصول با وزن حدود ‮‭۵۰۰‬ جفت باز به روش‮‭۲‬ طرفه سنجر تعیین توالی گردید .نتایج سکانس با استفاده از نرم-افزارهای ‮‭blast‬ مورد جستجوی همانندی نوکلئوتیدی قرار گرفت .نتایج حاکی از شباهت بسیار زیاد توالی‌های بدست آمده با بخشی از ژن ‮‭p۵۳‬ ثبت شده در بانک جهانی ژن بود .توالی‌های بدست آمده به تصویر ‮‭In Silico‬ مورد ترجمه قرار گرفت و نتایج همانندی توالی اسیدهای آمینه، توسط نرم‌صافزارهای موجود در سایت ‮‭expasy‬ مورد مقایسه قرار گرفت .در تمامی نمونه‌ا یک موتاسیون به تصویر اضافه شدن یک توالی ممتد ‮‭۲۷‬ اسیدآمینه‌ای در فاصله بین اسید آمینه‌های‮‭۵۷- ۳۰‬، مورد تایید قرار گرفت

Cancer in dogs is a common disorders and needs immediate and decisive veterinary attention. Due to advances in veterinary health care, dogs are living to older age when most cancers occur with high incidence. Cancer is now the leading cause of disease-related death in dogs, and as such, it has gained exceptional importance in our society. Genetic and environmental factors (air pollution, water pollution, infectious agents, and ionizing and non ionizing radiation and more specifically hormones and medications, occupational exposures, and lifestyle-associated risk factors such as diet) also have major effects on the temporal occurrence of cancer and are the basis of research on what causes cancer (pathogenesis), as well as prevention, diagnosis, treatment and prevention. Thus, a new emphasis has developed to learn more about genetic and environmental factors that influence cellular and molecular changes in canine cancer.The purpose of this project is, Evaluation of p53 gene mutations occurred in exon one in breast tumors of dogs using polymerase chain reaction (PCR) and sequencing. To perform this study 26, Paraffin block of breast tumor tissue of the archive of section of Pathology, Faculty of Veterinary Medicine, Tabriz, were used. Slides prepared from paraffin blocks In order to confirm the diagnosis of tumor and tumor type, were observed by the light microscope OLYMPUS-CH30 (Japan), and images were taken from slides by OLYMPUS DP12,U-TVO.5XC-2(Japan). DNA extraction was performed by using the boiling method and the use of silica gel kits, and after evaluating the concentration of the DNA, were analyzed by PCR and DNA sequencing. After replication of the gene p53, polymerase chain reaction products, with weight of approximately 500 bp were sequenced by two ways Sanjary method. BlAST software for nucleotide similarity search was used. The results obtained indicate very similar sequence of p53 gene is registered in the Gene BankThe obtained sequences were translated In Silico and amino acid sequence similarity results, were analyzed by software available on the expasy website.In all samples mutations in form of addition of 27 amino acid sequence at distance between of 30-57 amino acid, was detected

mutation

Dog

sequencing

PCR

زابلی پیله رود،ندا

جعفری جوزانی، رضی اله، استاد راهنما

اشرفی هلان، جواد، استاد مشاور

حنیفه، محسن، استاد مشاور

سیاه و سفید

نمایه‌سازی قبلی