۲۳۸۶۴پ
per
مطالعه اثرضد سرطانی ترکیبات مشتق شده از خانواده سیپروفلوکسازین بر روی رده های سلولی میلوئیدیKG۱ - aو K۵۶۲ سرطان خون
Anticancer effect of some new derivatives from ciprofloxacin family on two human myeloid leukemia cell lines (KG۱-a, K۵۶۲) via expression change of apoptosis-related genes
/فرهاد اسلامی
: علوم طبیعی
، ۱۳۹۸
، میرزائی
۱۲۶ص
چاپی - الکترونیکی
کارشناسی ارشد
زیست شناسی گرایش بیوشیمی
۱۳۹۸/۰۶/۱۶
تبریز
مقدمه :لوکمی یک نوع سرطان مغز استخوان و خون است که در آن مقدار بسیار زیادی از سلول های خونی غیر عادی تولید می شود که قادر به انجام صحیح وظایف خود نیستند AML .وCML ، دو نوع سرطان مربوط به لوکمی می‌صباشند که در آنها رده سلول های میلوئیدی که بعدها به گرانولوسیت ها و مونوسیت ها تمایز می یابند، دچار جهش و تغییرات سرطانی می‌صشوند .آپوپتوز، فرآیند برنامه ریزی شده مرگ سلولی است که تعداد سلول ها و از بین رفتن سلول های آسیب دیده را کنترل می‌صکند .بنابراین آپوپتوز یک مکانیسم اصلی سرکوب تومور در بدن است .یکی از رویکردهای درمانی در انواع روش های متداول از جمله رادیوتراپی و شیمی درمانی و ...افزایش القاء آپوپتوز در سلول های سرطانی می‌صصباشد .سیپروفلوکسازین و مشتقات گوناگون آن فعالیت ضدسرطانی مختلفی بر روی رده‌های سلولی مختلف انسانی از خود نشان داده اند .خانواده سیپروفلوکسازین به عنوان یک آنتی بیوتیک سنتتیک نسل دوم از فلوئوروکوئینولون ها، علاوه بر خاصیت ضد باکتریایی دارای خواص قوی ضد سرطانی می‌صباشند .بنابراین ما در این مطالعه به بررسی برخی عوامل دخیل در القاء آپوپتوز در سلول‌صهای سرطانی رده K۵۶۲ وKG۱ - aتوسط مشتقات جدیدی از خانواده سیپروفلوکسازین پرداخته می‌صشود . مواد و روش‌صها :سلول های هر دو رده سلولی با غلظت های ۵ تا ۱۲۰ میکرو مولار از ترکیبات مشتق شده از سیپروفلوکسازین تیمار شده و بقای سلولی توسط آزمون MTT تعیین گردید .غلظت مهاری ۵۰ (IC۵۰) با استفاده از اندازه گیری جذب بلورهای حاصل بدست آمد .وقوع و پیش برد آپوپتوز توسط رنگ آمیزی سلولی با رنگ هوخست و تصویر برداری با میکروسکوپ فلوئورسنس، آنالیز چرخه ی سلولی و رنگ آمیزی دوگانه ی AnnexinV/PI از طریق فلوسایتومتری و بررسی فعالیت کاسپاز ۳مورد ارزیابی قرار گرفت .درمطالعات مولکولی تغییرات بیان ژنهای Bcl۲، Bax ،,Survivin P۵۳ ، کاسپاز۳ ، کاسپاز ۸ و کاسپاز ۹به روشPCR - qRT مورد ارزیابی قرار گرفت و در نهایت بیان پروتئین های Bcl۲ ،Bax ، Survivin از طریق تکنیک وسترن بلاتینگ مورد ارزیابی قرار گرفت .نتایج : بر اساس نتایج بدست آمده از تست MTT ، IC۵۰ ترکیبDMOCP - ۴بر روی رده سلولیKG۱ - a، ۱۳/۲۲ میکرو مولار و بر روی رده سلولی K۵۶۲ ، ۵۶/۱۹ میکرومولار در ۷۲ ساعت محاسبه شد که بهترین اثر را در بین مشتقات دیگر و خود سیپروفلوکسازین داشت و برای ارزیابی ها و تست های بعدی از این ترکیب استفاده شد .نتایج بدست آمده حاکی از تغییرات مورفولوژیک همراه با فشردگی کروماتین، ایجاد قطعات DNA و توقف در مرحله ی G۰/G۱ از چرخه ی سلولی پس از تیمار سلول ها با ترکیب) در غلظت IC۵۰) بود .حضور فسفاتیدیل سرین در نیم لایه ی خارجی غشای سلولی، وقوع آپوپتوز در سلول هایKG۱ - aو K۵۶۲ را بعد از تیمار باDMOCP - ۴تایید نمود .آنالیز فعالیت کاسپاز ۳ افزایش فعالیت آن را در هر دو رده سلولی نشان داد .نتایج حاصل ازPCR- qRT ، کاهش بیان ژنهای Survivin و Bcl۲ و افزایش بیان ژنهای کاسپاز ۸ و۹ ، P۵۳ وBax را نشان داد .همچنین افزایش نسبت بیان ژنهای Bax/Bcl۲ با افزایش زمان تیمار دیده شد .از طرف دیگرکاهش بیان پروتئین های Survivin و Bcl۲ و افزایش بیان پروتئینBax نشان دهنده ی افزایش حساسیت سلول های تیمار شده نسبت به آپوپتوز در مقایسه با سلول های تیمار نشده می‌صباشد .نتایج حاصل، بیانگر اثر القاء و پیش برد آپوپتوز توسط مشتق سیپروفلوکسازینیDMOCP - ۴در هر دو رده ی سلولی از سرطان خون از هر دو مسیر داخلی و خارجی آپوپتوز می باشد
AML and CML as two groups of blood and bone marrow disorders include mutant and neoplastic myeloid cells. Induction of apoptosis has identified as an effective strategy in cancer therapy. Diverse synthetic compounds have been used for this purpose such as ciprofloxacin family. Ciprofloxacin derivatives (heterocyclic compounds with Nitrogen), have a large variety of biological activities and are considered as an appropriate candidate for cancer treatment. In the present study, we are supposed to assess the toxicity of some synthetic derivatives from Ciprofloxacin family and investigation of apoptosis-inducing activity of the most efficient compound by evaluation of changes in expression level of some apoptosis related genes and protein, including Survivin, Bcl2, Bax, p53, caspase 8 and caspase 9 that have a critical role in apoptosis regulation. For this purpose, KG1-a, AML and K562, CML cell lines will be treated with indicated doses of compounds to determine IC50 values by MTT assay. Then, the anticancer effect and apoptotic activity of active compound will be examined through hoechst staining assays as well as cell cycle distribution and caspase-3 activity assay. Furthermore, qRT PCR will be performed to study the expression of Survivin, p53, Bax, Bcl-2, caspase8 and 9 genes. Finaly western blot analyzing will be examined to evaluated of Bax, Bcl-2 and Survivin proteins. Based on the taken data, it seems that the 4-DMOCP compound from the ciprofloxacin family are good candidate for further assessment as an active compound acting via induction of apoptosis in acute and chronic myeloid leukemia
Anticancer effect of some new derivatives from ciprofloxacin family on two human myeloid leukemia cell lines (KG۱-a, K۵۶۲) via expression change of apoptosis-related genes
اسلامی، فرهاد
Eslami, Farhad
مهدوی، مجید، استاد راهنما
بابائی، اسماعیل، استاد مشاور
مصطفوی، حسین، استاد مشاور
سیاه و سفید
نمایه‌سازی قبلی
