۴۶پ
per
جداسازی ایزوله‌های باسیلوس تورینجینسیس از نمونه‌های تصادفی منطقه و شناسایی آن ها با استفاده از میکروسکوپ فاز کنتراست و PCR
/مریم سیفی کلهر
تبریز: دانشگاه تبریز، دانشکده کشاورزی ، گروه زراعت واصلاح نباتات
۹۵ ص
جدول، نمودار، عکس
چاپی
واژه نامه بصورت زیرنویس
کتابناه ص.: ۸۵-۹۴
کارشناسی ارشد
مهندسی کشاورزی-بیوتکنولوژی کشاورزی
۱۳۸۵/۱۱/۲۴
تبریز: دانشگاه تبریز، دانشکده کشاورزی ، گروه زراعت واصلاح نباتات
باسیلوس تورینجینسیس باکتری گرم مثبت و خاکزی‌صاست که در فاز استراحت) اسپورزایی (تولید پروتئین کریستالی می کند که از ویژگیهای اختصاصی آن است .تولید این پروتئیتن‌صها توسط ژن‌صهای Cry کنترل می‌صشود .این سموم پروتئینی دامنه‌صی میزبانی وسیع داشته و قادرند در مقابل خسارت سه راسته آفات دیپترا، کولئوپترا و لپیدوپترا موثر بوده و آن‌صهارا کنترل کنند .برای جداسازی باکتری‌صهای بومی منطقه و شناسایی ژن‌صهای مقاومت در آن-ها در سال ۱۳۸۴ ده نمونه از خاک استان‌صهای آذربایجان شرقی و قم جمع‌صآوری و پس از درج مشخصات مکانی به آزمایشگاه منتقل گردیدند .این باکتری‌صها با روش‌صهای اختصاصی استخراج باکتری Bt جداسازی شدند که ماده‌صی آزمایشی ابن تحقیق را تشکیل می دادند .برای آنالیز باکتری‌صهای جداسازی شده آزمایش بیوشیمیایی و میکروسکوپی به صورت تخصصیBt و غیر تخصصی صورت گرفت .از مهمترین آزمایشات، بررسی حضور کریستال پروتئین در باکتری‌صهای استخراج شده با استفاده از میکروسکوپ فاز کنتراست بود که در کلیه‌صی کلونی‌صها مطالعه و وجود آن‌صها در۲۱ کلنی از ۴۵ کلونی استخراج شده به اثبات رسید .به منظور شناسایی ژن‌صهای کنترل کننده‌صی مقاومت به روش‌صهای ملکولی، توالی گروه‌صهای مختلف ژنی شامل (Cry۱, Cry۲, Cry۳, Cry۴, Cry۵, Cry۶, Cry۷, Cry۸, Cry۹, Cry۱۱, Cry۱۸, Cry۲۱ ,Cry۲۶, Cry۲۸, Cry۲۹, Cry۳۰, Cry۳۱, Cry۳۲, Cry۳۴, Cry۳۵, Cry۳۹, Cry۴۰, Cry۴۱)از بانک ژنی www.ncbi.nlm.nih.gov جداسازی و با مطالعات بیوانفورماتیک برای طراحی آغازگرهای عمومی و اختصاصی بررسی گردید .براساس این مطالعات از بین گروه‌صهای مختلف دو گروه ژنی Cry۱ شامل ( (Cry۱Aa, Cry۱Ab, Cr۱y۱Ac و Cry۲شامل( Cry۲, Cry۲Aa۲, Cry۲Ab, Cry۲Ac, Cry۲Aa۵, Cry۲Ad۲) ، جهت طراحی آغازگرهای اختصاصی تعیین شدند .طراحی آغاز گرها با در نظر گرفتن اصول پایه برای فعالیت بهینه صورت گرفت .از آنجائی‌صکه این ژن‌صها بر روی DNA پلاسمیدی واقع شده اند، در گام بعدی جهت تائید عملکرد آغازگرها و در نهایت اثبات حضور ژن‌صهای مورد نظر، اقدام به جداسازی پلاسمید از این باکتری‌صها گردید .بررسی پلاسمیدها تنوع در اندازه را نشان داد .این تنوع می توانست با حضور سویه‌صهای مختلف Bt مرتبط باشد .پس از مرحله استخراج با استفاده از آغازگرهای اختصاصی اقدام به تکثیر و بررسی نهایی برای حضور ژن‌صهای مورد نظر گردید .تکثیر در برخی از باکتری‌صها به خوبی دیده شد که نشان دهنده‌صی حضور باکتری‌صهای مورد نظر بود.نتیجه تکثیر با PCR در سه گروه از سویه‌صها به ثبت رسید .یک-سری از سویه‌صها برای جفت آغازگرهای گروهI، یک‌صسری برای جفت آغازگرهای گروه IIو در برخی از سویه‌صها برای هر دو جفت آغازگر تکثیر قطعه مورد نظر صورت گرفت
Bt
سیفی کلهر، مریم
باغبان کهنه روز، بهرام، استاد راهنما
علی اصغر زاده، ناصر، استاد مشاور
ترابی، اسماعیل، استاد مشاور همکار
سیاه و سفید
نمایه‌سازی قبلی
