۲۲۰۶۳پ
per
بررسی اثر سیلی مارین، ATRA و ترکیب آن ها بر مهار رشد و القای مرگ سلولی رده سلولی NB۴ از خانوادهAPL
Study of silymarin, ATRA and their combination effect on the growth inhibition and cell death induction in the NB۴ cell line of APL family
/لیلا پارسا
: علوم طبیعی
، ۱۳۹۸
، راشدی
۷۸ص
چاپی - الکترونیکی
کارشناسی ارشد
زیست شناسی گیاهی گرایش سلولی تکوینی
۱۳۹۸/۰۶/۰۴
تبریز
بررسی آپوپتوز یا مرگ برنامه‌صریزی شده سلولی که در شرایط مختلف فیزیولوژیکی و پاتولوژیک اتفاق می‌صافتد یکی از شاخصه‌صهای تشخیص سرطان است .سرطان فرایندی چند مرحله‌صای می‌صباشد که در آن اختلال در چرخه سلولی و کاهش آپوپتوز منجر به افزایش پتانسیل آنژیوژنز، تهاجم و متاستاز می‌صشود .عواملی که بتوانند یک یا چند مورد از این فرآیندها را هدف قرار دهند، عوامل مؤثر در پیشگیری و درمان سرطان می‌صباشند .سیلی‌صمارین یک ترکیب پلی فنلی استخراج شده از دانه‌صهای گیاه خار مریم می‌صباشد که می‌صتواند از طریق تداخل در بیان ژن‌صهای درگیر در چرخه سلولی و آپوپتوز باعث ایجاد تعادل بین آپوپتوز و بقای سلولی شود و به این ترتیب اثرات ضدصسرطانی خود را با تنظیم چرخه سلولی و القای آپوپتوز در انواع مختلف سلول‌صهای سرطانی اعمال می‌صکند .علاوه بر این، سیلی‌صمارین با تنظیم یکسری پروتئین‌صهای خاص از خود اثر ضد التهابی و ضد متاستاتیک نشان می‌صدهد .لوسمی پرومیلوسیتیک حاد (APL) یکی از زیرگروه‌صهای شناخته شده‌صی AML می‌صباشد و از نظر مورفولوژیکی در سیستم طبقه‌صبندی FAB متعلق به زیرگروه M۳ AML می‌صباشد APL .از نظر سیتوژنتیکی در اثر رخداد یک جابه‌صجایی متقابل کروموزومی بین کروموزوم‌صهای ۱۷ و ۱۵ ایجاد می‌صشود که نتیجه این جابه‌صجایی تشکیل آنکوپروتئینRAR - PMLمی‌صباشد .وقوع این رخداد در نهایت منجر به مهار آپوپتوز می‌صگردد .از میان زیرگروه‌صهایAML ، APL قابل درمان‌صترین زیرگروه می‌صباشد ATRA .از جمله ترکیباتی است که برای درمان این بیماری بکارگرفته می‌صشود و یکی از متابولیت‌صهای فعال ویتامین A می‌صباشد که در سلول‌صهای رده NB۴ که متعلق به خانواده APL می‌صباشند، منجربه القای تمایز و آپوپتوز می‌صشود .در مطالعه حاضر به بررسی اثر سیلی‌صمارین و ATRA به‌صتنهایی و در ترکیب با هم بر القای آپوپتوز و مهار رشد سلول‌صهای رده‌صی NB۴ پرداخته‌ص شده است .در ابتدا زیستایی (Viability) سلول-های NB۴ تیمار شده با ترکیب سیلی‌صمارین در غلظت‌صهای۱۰-۲۰۰میکرومولار در مدت۲۴ ، ۴۸ و ۷۲ ساعت توسط تست MTT سنجیده شد .نتایج به دست آمده حاکی از کاهش زیستایی سلول‌صها در مدت ۴۸ ساعت در غلظت‌صهای۸۰ - ۲۰۰میکرومولار می‌صباشد .بعد از گذشت ۷۲ ساعت افزایش زیستایی سلول‌صها مشاهده‌صشد .با توجه به محاسبات انجام شده در این بررسی، غلظت IC۵۰ این ترکیب ۹۰ میکرومولار تعیین شد که برای آزمایشات بعدی مورد استفاده قرار گرفت .وقوع آپوپتوز توسط رنگ آمیزی سلولی با رنگ فلورسنت هوخست و تصویربرداری با میکروسکوپ فلورسنس، آنالیز چرخه‌صی سلولی و رنگ‌صآمیزی دوگانه‌صی AnnexinV/PI از طریق فلوسایتومتری با غلظت IC۵۰ سیلی‌صمارین و ۲ میکرومولار ATRA و ترکیب این دو مورد بررسی قرار گرفت .برای بررسی میزان گونه‌صهای فعال اکسیژن از آزمون ROS استفاده گردید .نتایج به دست آمده نشان می‌صدهد که میزان آپوپتوز القایی رخ‌صداده در هرکدام از آزمایشات صورت گرفته شامل تغییرات مورفولوژیکی حاصل از آپوپتوز نظیر فشردگی کروماتین و قطعه قطعه شدنDNA ، توقف سیکل سلولی در SubG۱ و حضور فسفاتیدیل سرین در نیم لایه‌صی خارجی غشای سلولی در حالتی که سلول‌صها با هر دو ترکیب تیمار یافته‌صاند بیشتر از زمانی است که با هریک از ترکیبات به‌صتنهایی تیمار شده‌صاند .نتایج حاصل از آزمون ROS بیانگر این می‌صباشد که سیلی‌صمارین به تنهایی درصد گونه‌صهای فعال اکسیژن را افزایش داده است .داده‌صهای به دست آمده، ترکیب سیلی‌صمارین را هم به‌صتنهایی و هم در ترکیب با ATRA به عنوان یک گزینه مناسب جهت مطالعات بیشتر در زمینه درمان لوسمی پرومیلوسیتیک حاد معرفی می‌صکند
The study of apoptosis that occurs in different physiological and pathological conditions is one of the characteristics in cancer diagnosis. Cancer is a multi-stage process in which disruption of cell cycle and apoptosis reduction increase the potential of angiogenesis, invasion and metastasis. Factors that can target one or more of these processes are factors that can influence cancer prevention and treatment. Silymarin is a polyphenolic compound that extracted from seeds of Milk Thistle that can interfere with the expression of the genes involved in the cell cycle and apoptosis, causing a balance between apoptosis and cell survival and thus exhibit its anti-cancer effects by regulation of the cell cycle and induction of apoptosis in various types of cancer cells. In addition, silymarin show anti-inflammatory and anti-metastatic effects by regulation of specific proteins. Acute promyelocytic leukemia (APL) is one of the AML subtypes and in the FAB classification system belongs to M3 subgroup of AML. APL is caused by the cytogenetic phenomenon due to chromosomal translocation between chromosomes 17 and 15, which results in the formation of PML-RARA anecoprotein. The occurrence of this event ultimately leads to inhibition of apoptosis. APL is the most curable subgroup of AML. ATRA is one of the compounds that used to treat of APL and is one of the active metabolites of vitamin A that results in induction of differentiation and apoptosis in the NB4 cell line of APL family. In the present study, we have been investigated silymarin, ATRA and their combination effects on the growth inhibition and cell death induction of NB4 cell line. The viability and growth inhibition of treated NB4 cells with silymarin in concentrations 10-200 M were measured during times 24, 48 and 72 hours. Results showed that the viability decreases in 80-200 M during 48 hours. After 72 h increase in growth and proliferation was observed. IC50 was determined as 90 M that was used for other experiments. Apoptosis was performed using Hocchest fluorescent stain and imaging with fluorescence microscopy, cell cycle and AnnexinV/PI double staining assessment with flow cytometry with IC50 concentration of silymarin and 2 M ATRA and their combination. ROS test was used to determine the amount of Reactive Oxygen Species. The results show that the incidence of apatiosis induction in each of the experiments included morphological changes such as chromatin condensation and fragmentation of DNA, cell cycle arrest in SubG1, and the presence of phosphatidiline serine in the outer membrane half-layer Cells in which the cells are treated with both compounds is more than once treated with each of the compounds alone. The results of the ROS test indicate that silymarin alone increased the percentage of Reactive Oxygen Species. The data suggest the silymarin, both alone and in combination with ATRA, as an appropriate candidate for further studies on acute promyelocytic leukemia treatment
Study of silymarin, ATRA and their combination effect on the growth inhibition and cell death induction in the NB۴ cell line of APL family
پارسا، لیلا
Parsa, Leila
متفکرآزاد، روح اله، استاد راهنما
مهدوی، مجید، استاد راهنما
کوثری نسب، مرتضی، استاد مشاور
سیاه و سفید
نمایه‌سازی قبلی
