۱۹۴۵۴پ
per
همسانه‌سازی ژن SOS۱ به روشPCR - RTاز گیاه Salicornia europaea
Cloning of SOS۱ gene by RT-PCR from Salicornia europaea
/سید امیرعلی طاهری اعظم
: کشاورزی
، ۱۳۹۶
، میرزائی
۷۳ص
چاپی - الکترونیکی
کارشناسی ارشد
بیوتکنولوژی کشاورزی
۱۳۹۶/۱۱/۱۶
تبریز
شوری خاک یکی از مشکلات اساسی در مزارع دنیا بوده و یکی از مهم‌صترین تنش‌صهای غیر زیستی گیاهان زراعی می‌صباشد .از این رو یکی از راهکارها، معرفی ارقام و واریته‌صهای متحمل به شوری است .امروزه استفاده از فن‌صآوری مهندسی ژنتیک جهت بهبود تحمل به شوری، یکی از راه‌صهای توانمندسازی گیاهان حساس برای حفظ میزان رشد و افزایش بهره‌صوری در شرایط تنش شوری محسوب می‌صگردد .گیاه سالیکورنیا از جمله گیاهان هالوفیتی است که دارای فعالیت مناسبی از پروتئین آنتی‌صپورتر SOS۱ می‌صباشد و دستیابی به ژن رمزگردان آن در این تحقیق هدف‌گذاری شد .در این تحقیقRNA ی کل به روش ترایزول استخراج و پس از تأیید کمی و کیفی آن در ژل الکتروفورز، اقدام به سنتز cDNA با استفاده از آنزیم‌ص ترانسکریپتاز معکوس و تکثیر آن به کمک آغازگرهای مستقیم و معکوس گردید .آغازگرهای اختصاصی مورد نیاز با استفاده از نرم‌افزارBlast Primer- طراحی و سفارش داده شدند .پس از تولید رشته اول cDNA از طریق آغازگرهای الیگو dTو معکوس، قطعه ژن SOS۱ توسط آغازگرهای اختصاصی از طریق PCR تکثیر یافت .محصول حاصل از PCRپس از تأیید طول قطعه در الکتروفورز ژل آگارز ۰/۸ درصد از ژل تخلیص و در پلاسمید خطیpTG۱۹ - Tدرج و سپس در باکتری E.coli سویه DH۵ همسانه‌صسازی گردید .برای تهیه سلول‌صهای مستعد از روش TSS و برای انجام تراریختی باکتریایی از روش شوک حرارتی استفاده شد .پس از غربال‌صگری باکتری‌صهای تراریخته به روش آبی ـ سفید در حضور آمپی‌صسیلین، IPTG وgal- X، استخراج پلاسمید از باکتری‌صهای نوترکیب انجام و پس از تأیید آن جهت توالی‌صیابی به شرکت Bioneer ارسال شد .در مرحله آخر توالی قرائت شده از دو انتها با استفاده از نرم‌صافزارهای NCBI بررسی انطباقی شده و مشابهت و تفاوت آن با توالی ژن‌صصهای ثبت‌شده در بانک‌صهای نوکلئوتیدی، تعیین شد
Soil salinity is one of the major problems in the world's farms and it is also one of the most important abiotic stresses of the plants. Hence, one of the solutions to soil salinity is the introduction of varieties that are tolerant to salinity. Today, genetic engineering is employed to improve salinity tolerance of the plants, one of the strategies to empower sensitive plants to be able to maintain their growth and increase productivity in salinity conditions. The Salicornia spp. plant is a halophyte plant in which the SOS1 antiporter protein has efficient activity. So, obtaining Salicornias encoder gene was targeted in this research. In this study, the total RNA was extracted by the Tryzol method, and after quantitative and qualitative confirmation in the electrophoresis gel, cDNA was synthesized using reverse transcriptase enzyme and its replication was done by forward and reverse primers. Required specific primers by Primer Blast were designed and then ordered. After production of the first strand of cDNA by oligo-dT and reversed primers, the SOS1 gene was cloned by specific primers through PCR. The cDNA obtained by PCR, after confirmation of the length of the segment into 0.8 percent agarose electrophoresis gel, was purified from the gel and inserted in the linear plasmid pTG19-T, and then cloned in E. coli bacterias DH5 strain. The TSS method was used to prepare comptent cells and the thermal shock method was used for bacterial transformation. Following the screening of transgenic bacteria with white-blue approach in the presence of ampicillin, IPTG and x-gal, plasmid extraction was performed from recombinant bacteria and then sent to Bioneer Corporation for sequencing. Finally, the obtained sequence from the two ends was evaluated using NCBI software and its similarity and difference with the sequences of the registered genes in the nucleotide banks were determined
Cloning of SOS۱ gene by RT-PCR from Salicornia europaea
طاهری اعظم، سید امیرعلی
Taheri Azam, Amirali
استاد مشاور
سیاه و سفید
نمایه‌سازی قبلی
