۱۸۳۶۹پ
per
شناسایی همسانه سازی نواحی جناحین ناقل های پلاستیدی نیتراریاNitraria schoberi))
/ندا فتاحی میاب
: کشاورزی
، ۱۳۹۵
، راشدی
چاپی
کارشناسی ارشد
بیوتکنولوژی کشاورزی
۱۳۹۵/۱۱/۱۰
تبریز
نیتراریا (Nitraria schoberi) گیاهی چندساله و هالوفیت می‌صباشد .وجود این گیاه هالوفیت در کانون تولید گرد و غبار و تثبیت شن‌صهای روان بسیار موثر شناخته شده است .نیتراریا از لحاظ تولید پروتئین‌صهای نوترکیب درون سیستم‌صهای مهندسی‌صشده کلروپلاستی و تولید گیاه ترانس‌صپلاستومیک ارزشمند می‌صباشد .برای تحقق این موضوع در دسترس بودن ناقل پلاستیدی اختصاصی شرط الزامی بوده و جداسازی و همسانه‌صسازی نواحی جناحین موردنیاز این ناقل از گیاه نیتراریا، در این تحقیق هدف‌صگیری شده صاست .اختصاصی بودن این ناقل مربوط به حضور توالی‌صهای مشابه از ژنوم پلاستیدی نیتراریا در ناقل می‌صباشد .تا امکان نوترکیبی‌صهمتا بین ناقل و ژنوم پلاستیدی فراهم گردد .در این تحقیق پس از تعیین نواحی هدف طراحی آغازگرهای اختصاصی برای تکثیر این نواحی به کمک نرم‌صافزارهای Primer Blast و Oligo Analayzerصورت گرفت .پس از استخراج ژنوم کل واکنش زنجیره‌صای پلیمراز تکثیر قطعات DNA کلروپلاستی صورت پذیرفته‌ص و سپس عملیات همسانه‌صسازی با روش همسانه‌صسازی T/A و در سویه‌صی DH۵ باکتری E.coli و در ناقل خطیpTG۱۹ - Tانجام گرفت .برای تهیه سلول‌صهای مستعد از روش TSS و برای انجام تراریختی باکتری‌صها از شوک حرارتی استفاده شد .غربالگری باکتری‌صهای تراریخته نوترکیب در حضور آنتی‌صبیوتیک آمپی‌صسیلین صورت گرفته و برای آنالیز آن‌صها از کلنی PCR و روش برش آنزیمی استفاده شد .پس از موفقیت در همسانه‌صسازی و تایید حضور نواحی جناحین ژنوم کلروپلاستی در ناقل پلاسمیدی، توالی یابی آن توسط شرکت Bioneer کره جنوبی انجام گرفته و با دسترسی به این اطلاعات، نسبت به تایید مولکولی آن از طریق نرم افزار بیوانفورماتیکی اقدام شد .نتایج بررسی‌صهای بیوانفورماتیکی نشان دادند که توالی مربوط به نواحی همسانه‌صسازی شده با اطلاعات نوکلئوتیدی ثبت شده از گیاهان دیگر، در پایگاهNCBI ، قریب به ۹۸ همولوژی دارد
Nitraria (Nitraria schoberi) is a perennial plant and belongs to the Nitrariaceae family. Given the importance of this halophyte plant in fixing the region dunes sands, and expression of recombinant proteins into the chloroplast engineered systems, Plastomic Nitraria production is valuable. To achieve this topic, specific plastidial vector availability is essential and cloning of flanking regions of the plant Nitraria, has been targeted in this study. The vector specificity related to the presence of similar sequences in the Plastidial genome is Nitraria vector allowing recombination between the vector and the Plastidial genome be provided. After determining the target areas, primers design to reproduce these areas, were carried out with using of Primer Blast and Oligo softwares. After the entire genome extraction and polymerase chain reaction, amplification was performed and then cloning operations were done by using cloning T/A and the strain of the bacteria E.coli DH5 and linear vector pTG19-T. TSS to prepare competent cells and heat shock for bacterial transformation were used. Screening of recombinant bacteria in the presence of antibiotics ampicillin and for analysis of colony PCR and enzymatic digestion method was employed to help place the shear mounted at boot. After successfull cloning and the presence of chloroplast genome in plasmid, sequencing was performed by the company Bioneer South Korea and with access to this information, to confirm its molecular bioinformatics application through the action. Bioinformatic studies results showed that the sequence of the cloned area with the information recorded in the database NCBI nucleotide homology is approximately 98
فتاحی میاب، ندا
باغبان کهنه‌صروز، بهرام، استاد راهنما
قلی زاده، اشرف، استاد مشاور
دباغ محمدی نسب، عادل، استاد مشاور
سیاه و سفید
نمایه‌سازی قبلی
