۱۷۴۹۰پ
per
بررسی اثر آپوپتوتیک کروسین در رده های سلولی حساس (OV۲۰۰۸) و مقاوم به داروی سیسپلاتین (C۱۳) در سرطان دهانه رحم از طریق ارزیابی تغییر بیان ژن هایBax ، Bcl۲و۳۶۵ -miR
/هما ملایی
: علوم طبیعی
، ۱۳۹۶
، افشاری
چاپی
کارشناسی ارشد
ژنتیک مولکولی
۱۳۹۶/۰۶/۲۰
تبریز
سرطان دهانه رحم چهارمین سرطان شایع در میان زنان محسوب می شود .روش های درمانی مرسوم برای این سرطان اغلب به دلیل عوارض جانبی داروهای شیمی درمانی و نیز مقاومت دارویی ایجاد شده کارایی کافی ندارند .از این رو در دهه های اخیر درمان ترکیبی با گیاهان دارویی مورد توجه بسیاری از دانشمندان قرار گرفته است .کروسین یکی از اصلی ترین کاروتنوئیدهای زعفران می باشد که اثرات ضد سرطانی آن در پژوهش های مختلف مورد بررسی قرار گرفته است اما مکانیسم مولکولی دقیق عمل این کاروتنوئید تا حدود زیادی ناشناخته است .لذا ما در این مطالعه به بررسی اثرات آپوپتوزی کروسین در رده های سلولی حساس (OV۲۰۰۸) و مقاوم به داروی سیسپلاتین (C۱۳) در سرطان دهانه رحم از طریق ارزیابی تغییر بیان ژن های آپوپتوزیBax ، Bcl۲ و۳۶۵ -miRبه عنوان تنظیم کننده بالادست این ژن ها پرداختیم .به این منظور ابتدا خاصیت ضد تکثیری و پروآپوپتوزی کروسین در حضور و عدم حضور سیس پلاتین، بر روی رده های سلولی حساس و مقاوم به ترتیب با روش هایMTT ، رنگ آمیزی هوکست و فلوسایتومتری مورد ارزیابی قرار گرفت .سپس به منظور بررسی مکانیسم مولکولی اثرات ذکر شده میزان بیان ژن هایBax ، Bcl۲ و۳۶۵ - miRقبل و بعد از تیمار با غلظت های بهینه به روشtime PCR - realو هم چنین میزان بیان پروتئین های Bax و Bcl۲ به روش وسترن بلات مورد مطالعه قرار گرفت .نتایج حاصل نشان داد تیمار سلولی با کروسین در حضور سیس پلاتین موجب کاهش حداقل غلظت توکسیک (IC۵۰) نسبت به تیمار های جداگانه کروسین و سیس پلاتین در هر دو رده سلولی می شود .هم چنین مرگ سلولی القاء شده از نوع آپوپتوز می باشد و تیمار ترکیبی، درصد سلول های آپوپتوزی القا شده را در هر دو رده سلولی نسبت به تیمارهای جداگانه افزایش می دهد .علاوه بر این نتایج بررسی های مولکولی نیز نشان داد تیمار با کروسین منجر به افزایش سطح بیان ژن پرو آپوپتوتیکBax ، کاهش سطح بیان ژن آنتی آپوپتوتیک Bcl۲ و۳۶۵ -miRمی شوند هرچند میزان این تغییرات در رده سلولی حساس نسبت به رده سلولی مقاوم قابل ملاحظه تر است .از سوی دیگر داده های وسترن بلات نیز نشان داد کروسین منجر به تغییر چشمگیر بیان پروتئین های مورد بررسی می گردد .این نتایج درکنار نتایج قبلی که نشان دهنده عدم سمیت کروسین بر سلول های نرمال بودند پیشنهاد می کند این کاروتنوئید می تواند با هدف گیری تنظیم کننده های اصلی آپوپتوز در کاهش مقاومت دارویی موثر بوده و پس از انجام آزمایشات تکمیلی به عنوان یک عامل کمکی در کنار سیس پلاتین مورد استفاده قرار گیرد
Cervical cancer is the fourth most common cancer among women. Current therapeutic methods are not completely efficient because of unwanted side effects of chemotherapeutic drugs and drug resistance. Hence, in recent decades, combination therapy with medicinal plants has been atracting many scientists. Crocin is one of the main carotenoids of saffron that its anti-cancer effects have been studied. However, its molecular mechanism of action is not fully understood. So in this study, we aimed to investigate the apoptotic effect of crocin in both cisplatin sensitive (OV2008) and resistance (C13) cervical cancer cells through assessment of expression alternation of apoptotic genes of Bax, Bcl2 and miR-365 as upstream regulator of them. To this end, initially, anti- proliferative and pro apoptotic effect of crocin in the present and absent of cisplatin on OV2008 and C13 cell lines have been assessed by MTT test, Hoescht staining and flowcytometry. Then Real-time PCR performed to evaluate the molecular mechanism of mentioned effects by assessment the expression level of Bax, Bcl2 and miR-365 before and after treatment with effective doses. Moreover western blotting has been done to evaluate the protein level of Bax and Bcl2. Our results showed that treatment of cells with crocin in the present of cisplatin led to decrease the minimum toxic concentration (IC50) of crocin and cisplatin in comparison with individual treatments. Also induced cell death is of apoptosis and combinational treatment increased percentages of apoptotic cells in both cell lines. Moreover, molecular analysis proved that treatment of cells with crocin led to up regulation of Bax and down regulation of Bcl2 and miR-365 at mRNA level. However, these alternations were more significant in sensitive cell line. On the other hand western blotting data showed that crocin led to obvious alternation of mentioned proteins. These results beside the previous results that indicated lack of cytotoxicity of crocin on normal cells suggest that this carotenoid could be effective in the reduction of drug resistance due to target the main regulators of apoptosis and serve as an adjuvant therapy with cispaltin after complementary research on model organisms and clinical trial
ملایی، هما
صفرعلیزاده، رضا، استاد راهنما
بابائی، اسماعیل، استادراهنما
هوشیار، ریحانه، استاد مشاور
عابدینی، محمد رضا، استاد مشاور
سیاه و سفید
نمایه‌سازی قبلی
