۱۶۶۹۷پ
per
طراحی و ساخت سازه RNAi اختصاصی برای ژن اورنتین دکربوکسیلاز توتون
/مرتضی درختی دیزجی
: کشاورزی
، ۱۳۹۴
، راشدی
چاپی
کارشناسی ارشد
بیوتکنولوژی کشاورزی
۱۳۹۴/۱۱/۱۳
تبریز
توتون یکی از محصولات با ارزش از لحاظ کشاورزی و صنعتی به شمار می‌صرود و برگ‌صهای آن در صنایع تولید سیگار استفاده می‌صشود .نیکوتین یکی از ترکیبات مهم توتون و جزء ترکیبات آلکالوئیدی محسوب می‌صشود و امروزه به طور قطع در ردیف مواد سمی با اثرات بسیار مضر برای سلامتی انسان قرار دارد .کاتیونN - متیل پیریلینیوم تولید شده در مسیر بیوسنتز آلکالوئیدصهای تروپانی یک ماده حد واسطی برای مسیر بیوسنتزی نیکوتین می‌صباشد .این ماده حد واسط از تأثیر آنزیم اورنیتین دکربوکسیلاز بر روی اورنتین و چند مرحله دیگر حاصل می‌صشود و با جلوگیری از فعالیت این آنزیم می‌صتوان مقدار تولید نیکوتین رو کاهش داد .جهت نایل شدن به این هدف ابتدا از طریق بانک‌صهای اطلاعاتی، توالی ژن اورنیتین دکربوکسیلاز مشخص شده و برای تکثیر اختصاصی آن‌صها با استفاده از نرم افزارصهای پرایمر- بلاست آغازگر طراحی و برای سنتز سفارش گردید .بعد از تکثیر قطعه سنس و همسانه‌صسازی آن در وکتورpTG۱۹ - Tو باکتری E.coli سویهDH۵ ، استخراج پلاسمید و برش آنزیمی جهت اطمینان از ورود قطعه صورت پذیرفت و برای توالی‌صیابی فرستاده شد .سپس با توجه به توالی موجود و بررسی‌صهای بیوانفورماتیکی بهترین ناحیه از ژن که مستعد تولید ساختار سنجاق‌صسری با توالی سنس بود به عنوان آنتی‌صسنس انتخاب و تکثیر و در وکتورpTG۱۹ - Tهمسانه گردید .در ادامه با برش هر دو وکتور حاوی قطعه سنس و آنتی‌صسنس و تخلیص‌صسازی آن‌صها، عمل اتصال قطعه آنتی‌صسنس به انتهای وکتور حاوی قطعه سنس انجام پذیرفت و بعد از تایید پلاسمید استخراجی به وسیله برش‌صهای آنزیمی، جهت توالی-یابی فرستاده شد .نتیجه توالی‌صیابی نوکلئوتید، پتانسیل و توانایی این کاست جهت تولید ساختار سنجاق-سری مد نظر را نشان داد
Tobacco is one of the valuable agricultural and industrial crops and its leaves are used in cigarette production. Nicotine is one of the tobacco alkaloids components and account for as a highly toxic with certain severe effects on human health. N-methyl-pyrrolinium cation, which are produced in tropane alkaloids biosynthesis pathway, are nicotine biosynthesis intermediate. This intermediate component are produced through ornithine decarboxylase enzyme action on ornithine and subsequent several stages. Inhibiting that enzyme can decrease nicotine production. To this aim, ornithine decarboxylase gene sequence retrieved from nucleotide data bank and Primer-Blast software was used for designing specific primer. After amplification of sense fragments and cloning it in E.coli DH5 using pTG19-T vector, plasmid extraction and enzymatic digestion was performed for cloning validation, and followed by sending to sequencing. Subsequently, with considering available sequence and bioinformatical survey the best region of gene for hairpin formation were selected, amplified, and cloned in pTG19-T vector as antisense sequence. In forward, both of vectors with sense and antisense fragment were digested and purified. Finally, the vector containing the sense fragment were ligated to antisense and after enzymatic evaluation of extracted plasmid from positive cloning, it was sent for final sequencing. The obtained result of nucleotide sequence showed the potential ability of this cassette to produce hairpin structure of interest
درختی دیزجی، مرتضی
باغبان کهنه روز، بهرام، استاد راهنما
قلی زاده، اشرف، استاد مشاور
سیاه و سفید
نمایه‌سازی قبلی
