مطالعه اثرات پاتولوژیک آلودگی با کاندیدا آلبیکنس در همکشتی سلولهای بنیادی اسپرماتوگونی با سلولصهای
/مهداد تیرانداز
: دامپزشکی
، ۱۳۹۵
، راشدی
چاپی
کارشناسی ارشد
دامپزشکی
۱۳۹۵/۰۹/۲۹
تبریز
کاندیدا آلبیکنس (Candida albicans) عامل کاندیدیاز گوسفند، دارای قدرت بیماریزایی بیشتری نسبت به سایر انواع کاندیداها میباشد و از بین همهی کاندیداها شایعتر میباشد .این عامل به صورت فرصت طلب در مواقع بروز ضعف ایمنی، حیوان را مبتلا مینماید .کاندیدا آلبیکنس میتواند با ایجاد ارکیت و اپیدیدیمیت در روند طبیعی قدرت باروری قوچها اختلال ایجاد کند .سلولهای اسپرماتوگونی بیضه تنها سلولهای بنیادی بدن هستند که هم دارای قدرت خودافزایی (self renewal) و هم قدرت انتقال ژن به نسلهای بعدی هستند .این سلولها در طول حیات مرتبا تقسیم شده و با تولید اسپرماتوزوئیدها قدرت باروری جنس نر را حفظ میکنند .آسیبهای وارد شده به بافت بیضه با تحت تأثیر قرار دادن سلولهای بنیادی، باروری جنس نر را متأثر میسازند .در این مطالعه، جداسازی، خالصسازی و کشت سلولهای بنیادی اسپرماتوگونی بیضهی گوسفند به همراه سلولهای سرتولی، در محیط کشتF۱۲ -DMEM، انجام گرفت .ماهیت سلولهای بنیادی اسپرماتوگونی و سرتولی توسط تکنیک ایمینوسیتوشیمی تایید شد .سپس سلولها با قارچ کاندیدا آلبیکنس در پنج گروه با دزهای متفاوت قارچی آلوده شدند و یک گروه نیز به عنوان گروه کنترل در نظر گرفته شد و هیچ قارچی به آن اضافه نشد .بعد از رشد قارچها در مدت ۲۴ ساعت، سلولها به همراه قارچهای رشد کرده توسط متانول فیکس شده و با رنگ هماتوکسیلین-ائوزین رنگآمیزی شدند .اثر سیتوپاتیک قارچ کاندیدا آلبیکنس از طریق بررسیهای ریختشناسی و اندازهگیری شاخصهای آسیب سلولی لاکتات دهیدروژناز و مالون دیآلدهید بعد از طی مدت ۲۴ ساعت مورد ارزیابی قرار گرفت .نتایج این مطالعه نشان داد که کاندیدا آلبیکنس روی سلولهای سرتولی و سلولهای بنیادی اسپرماتوگونی در طی مدت ۲۴ ساعت اثر سیتوپاتیکی را با وارد نمودن آسیب سلولی و رشد سریع در محیط، ایجاد میکند .میزان آسیب سلولی و شاخصهای آسیب سلولی با افزایش دوز قارچ در گروههای مختلف افزایش یافته بود
Candida albicans is the cause of candidiasis in sheep and of their pathogenicity is higher than the other candidates. This species infections is the top source of fungal infections in critically ill or otherwise immunocompromised patients. Candida albicans can cause disorder of fertility in ram with epididymitis and orchitis. Spermatogonia stem cells are the only stem cells in mammalian body that can have the ability of self renewal of their cells and transmitting genetic informations to the next generation. These cells keep proliferating during sexual life of male animals and therefore keeping their fertility. The damages to testis, affects germ cells and consequently influences male fertility. In the present study we isolated and co-cultured spermatogonial stem cells (sscs) with Sertoli cells. SSCs and sertoli cells were identified by vimentin and Oct-4 immunocytochemical staining method, respectively. The cells were infected with candida albicans in five groups with different doses and one group was considered as control. After fungal growth within 24 hours, cells and fungus were fixed with methanol and stained with hematoxylin and eosin. In this study, cytopathic effects of candida albicans were evaluated by morphological changes and LDH and MDA measurement. The data indicated that Candida albicans had cytopathic effect on SSCs and sertoli cells, during 24 hours infection, The rapid growth of the candida, Increased levels in Lactate dehydrogenas and Malon dialdehyde