استراتژی افزایش متانول جهت بیان بهینه پروتئین در فرآیند تخمیر آنتی ژن هپاتیت B
[پایاننامه]
/بابک آخشیک
دانشگاه صنعتی سهند
۱۳۸۹
۱۰۶ ص۰
چاپی - الکترونیکی
کتابنامه در آخر پایان نامه
کارشناسی ارشد
مهندسی شیمی
دانشگاه صنعتی سهند
آنتی ژن سطحی هپاتیت B پروتئین غیر انسانی است که توسط مخمرها و سلولهای حیوانی تولید میشود و به عنوان واکسن جهت پیشگیری از بیماری هپاتیت B استفاده می شود .مخمر پیچیا پاستوریز که یک مخمر متان دوست است به عنوان بهترین گزینه جهت میزبانی تولید این پروتئین نوترکیب شناخته شده است .پیچیا پاستوریز بدلیل داشتن ژن الکل اکسیداز میتواند متانول را اکسید و مصرف نماید۰ متانول این پروموتر را فعال کرده و مخمر شروع به تولید پروتئین مینماید۰ مهمترین راه بالا بردن بهرهوری تولید این پروتئین در فرمانتور غیر مداوم همراه با خوراک دهی، استفاده از شیوه صحیح خوراک دهی میباشد۰ روشهای متفاوتی برای خوراک دهی وجود دارد. که از میان آنها میتوان تزریق متانول با نرخ ثابت یا نرخ نمایی اشاره کرد۰ خوراک دهی با نرخنمایی از تجمع متانول در فرمانتور جلوگیری میکند و همزمان با افزایش تراکم توده سلولی مقدار آن بالا میرود۰ در این تحقیق شیوه خوراکدهی متانول در انیستیتوپاستور ایران بررسی گردید وامکان افزایش بهرهوری پروتئین هپاتیت ب با افزایش یا کاهش مورد تحقیق قرار گرفت۰ فاکتورهای محیطی نظیر دما ، pH و دور همزن ثابت بوده و تنها پروفایل خوراک دهی متانول بر اساس ضرایبی از خوراک دهی در انیستیتو پاستور صورت گرفت۰ خوراکی دهی با توجه به افزایش توده سلولی به شکل نمایی به صورتی که ثابت باشد انجام گرفت ۰ پروتئین نوترکیب تولید شده از تخمیر در مقیاس آزمایشگاهی ، با ضرایب ۸/. و ۹/. از خوراک دهی متانول در فرآیندهای جاری پاستور پایین بودند۰ تخمیر اب ۱۰ افزایش در متانول ورودی باعث افزایش توده سلولی و ۵ افزایش در تولید پروتئین نوترکیب گردید .در تخمیر با ۲۰ افزایش در متانول ورودی ، تراکم توده سلولی بدلیل ممانعت کنندگی متانول کاهش یافت، اما مقدار پروتئین نوترکیب هپاتیت B تولیدی به سبب تشدید شرایط القاء ۱۰ افزایش پیدا کرد .افزایش متانول به مقدار ۳۰ باعث مسمومیت و مرگ سلولی گردید .از این رو می توان مقدار متانول ورودی را ۲۰ افزایش داد.