عنوان
پدید آورنده
موضوع
رده
کتابخانه
محل استقرار
۹۸۰۱۷پ
فارسی
بررسی قابلیت فیکساتیو ابداعی در مقایسه با مشابه خارجی در حفظ مورفولوژی سلول های HeLa و پایداری محتوای DNA سلولی جهت تشخیص ویروس پاپیلومای انسانی (HPV)
[پایان نامه]
غزل صداقت شایگان
دانشگاه علوم پزشکی تهران، دانشکده پزشکی
۱۴۰۰
۱۲۲ص.
سی دی
کارشناسی ارشد
ژنتیک انسانی
۱۴۰۰/۱۱/۰۶
مقدمه و هدف: تست غربالگری جهت پیگشیری از سرطان سرویکس حداقل هر 5 سال یک بار تکرار میشود و اگر یک عفونت پایدارو فعال با تایپ های سرطان زای ویروس پاپیلومای انسانی تشخیص داده نشود در مدت 5 سال میتواند تغییرات پاتولوژیکی زیادی در فرد ایجاد کند. از این رو جهت افزایش صحت و دقت تست انجام شده می توان از فیکساتیو مناسب و سازگار با تست های تشخیصی بر اساس مورفولوژی سلول های سرویکس و تست های ژنتیکی اختصاصی برای HPV استفاده نمود. چنین فیکساتیوی شرایط انتقال نمونه و نگه داری آنها، تشخیص نوع و فاز فعالیت HPV، و تصمیم گیری های متناسب پزشکی را تسهیل میکند. در این پروژه تلاش شد فیکساتیوی مناسب برای هر دو نوع تست سلولی و مولکولی مرتبط با تشخیص HPV ساخته شود که بتواند ضمن حفظ جمعیت سلولی در نمونه ی بیولوژیکی، پیوستگی طولی در محتوای DNA و RNA سلولی را حفظ کند. روش کار: فیکساتیو های مختلف با ترکیب 3 ماده ی الکل، بافر، و افزودنی از نوع نمک و پلی هیدریک الکل ساخته شدند. سلول های HeLa با تعداد یکسان به هر یک از فیکساتیو های ساخته شده اضافه شدند و پایداری مشخصه های بیولوژیکی در نمونه با شمارش دستی سلول ها و مشاهده ی پیوستگی طولی در DNA و RNA استخراج شده روی ژل آگارز 1% بررسی شد. واکنش PCR برای تکثیر انکوژن های E6 و E7 و امپلیکون های بزرگتر جهت بررسی ثبات توالی هدف تحت شرایط ذخیره سازی انجام شد. پتانسیل فیکساتیو ابداعی در پیشگیری از تخریب RNA نسبت به فیکساتیو تجاری با انجام qRT-PCR روی تعداد مشابه سلول های فیکس شده سنجیده شد. نمونه های سرویکس در 20 میلی لیتر از فیکساتیو ابداعی جمع آوری شد و برای تأیید کارامدی آن به آزمایشگاه نیلو ارسال شد. یافته ها: تعداد سلول های فیکس شده با تغییرات ایجاد شده در هر یک از 3 جزء فیکساتیو ثابت باقی ماند به استثنای موارد حاصل از افزودن سدیم استات، 5% PEG8000، 1% Mannitol و1% PEG 200، و 40% متانول. علی رغم آنکه تعداد سلول ها در اغلب فیکساتیو های ساخته شده بعد از نگهداری ثابت باقی ماند، تفاوت چشمگیری در میزان DNA و RNA سلولی استخراج شده از آن فیکساتیو ها دیده شد. فیکساتیو حاوی اتانول 40% و بافر استات کارامدترین مورد جهت حفظ پایداری DNA و RNA سلولی در زمان ذخیره سازی بود. افزودن دو نوع خاص از پلی هیدریک الکل به این ترکیب باعث افزایش میزان DNA و RNA شد. افزودن 5% Mannitol و 2% PEG8000 به مهار تخریب نوکلئیک اسید ها کمک میکند. نتیجه گیری: فیکساتیو ابداعی طبق نتایج به دست آمده نه تنها برای بررسی های سلولی بلکه برای هر دو نوع آنالیز بر اساس DNA و RNA مناسب است و میتوان آن را به عنوان فیکساتیوی که میتواند با روش های غربالگری HPV بر اساس RNA سازگار باشد در نظر گرفت.
دی.ان.ا
DNA
a11
a11
فیکساتیو ابداعی
HPV
RNA سلولی
، پدیدآور
صداقت شایگان، غزل
، استاد راهنما
مدرسی، محمدحسین
دانشگاه علوم پزشکی تهران، دانشکده پزشکی
ایران
20230213
۲۲۸۹ف
دانشگاه علوم پزشکی تهران، کتابخانه دانشکده پزشکی
p
TF
92029
a
Y
