بررسی متیلاسیون و بیان ژن های ITGB2 (CD18) و SELL (CD62L) در سلول های تک هسته ای خون محیطی بیماران مبتلا به سیستمیک اسکلروزیس
[پایان نامه]
نوید دشتی گوله گوله
دانشگاه علوم پزشکی تهران، دانشکده پزشکی
۱۳۹۷
۷۴ص.
جدول نمودار
سی دی
کارشناسی ارشد
ایمنی شناسی پزشکی
مقدمه: سیستمیک اسکلروزیس (SSc)، بیماری خودایمن بافت همبند می¬باشد. التهاب، فیبروز و آسیب به اندوتلیال عروق از مشخصات این بیماری است. محصول ژن های ITGB2 (Integrin subunit beta 2) و SELL (Selectin L) در چندین مسیر عملکردی سیستم ایمنی به عنوان ملکول واسطه در مهاجرت لکوسیت ها به بافت های هدف و واسطه تشکیل سیناپس ایمونولوژیک در پاسخ های ایمنی مشارکت می کنند. هدف این مطالعه بررسی وضعیت متیلاسیون نواحی CpG در توالی پروموتر ژنهای ITGB2 و SELL در سلول های تک هسته ای خون محیطی (PBMCs) بیماران SSc و کنترل سالم و ارتباط آن با بیان این ژنها میباشد.مواد و روش ها: از نمونه خون 50 بیمار و 30 فرد کنترل سالم، PBMCs جداسازی شد. محتوای DNA و RNA از PBMCs استخراج شد. بیان ژن با تکنیک Real-Time PCR روش SYBR Green بررسی شد. به منظور بررسی وضعیت متیلاسیون نواحی CpG، نمونه¬های DNA با بیسولفیت مجاورت داده شد. سپس، ناحیه مورد نظر در پروموتر ژن با تکنیک Nested PCR تکثیر شد و به روش سنگر (Sanger difficult sequencing) توالی یابی انجام گرفت. داده های بیان ژن و متیلاسیون، به ترتیب با نرم افزار SPSS و Codon Code Aligner آنالیز شد.نتایج: بیان ژن ITGB2 در PBMCs بیماران SSc در مقایسه با گروه کنترل افزایش معناداری یافته بود؛ ولی بیان ژن SELL تفاوت معناداری نشان نداد. در توالی پروموتر ژن ITGB2، سه ناحیه CpG به شماره های 12، 13 و 14 در گروه بیماران بطور معنادار متیلاسیون آنها کاهش یافته بود؛ ولی وضعیت کلی متیلاسیون بین گروه های مورد مطالعه تفاوت معناداری نشان نداد. همچنین، همبستگی معناداری بین وضعیت متیلاسیون پروموتر ITGB2 و بیان آن در PBMCs بیماران وجود نداشت.بحث و نتیجه گیری: با توجه به فقدان همبستگی بین بیان افزایش یافته ژن ITGB2 و کاهش متیلاسیون پروموتر آن در بیماران SSc، مطالعه حاضر بیانگر آن است که افزایش بیان ITGB2 در PBMCs بیماران SSc احتمالاً به دلیل مکانیسم دیگری غیر از تغییرات متیلاسیون می باشد.