تاثیر آنتی اکسیدانهای آلفاتوکوفرول و کاتالاز بر روی کلونی زایی و میزان بیان ژن های آپوپتوتیک (Bcl2 ، Bax) سلولهای بنیادی اسپرماتوگونی موش به دنبال فرایند انجماد– ذوب
[پایان نامه]
فرشته علی اکبری
دانشگاه علوم پزشكی تهران، دانشكده پزشكی
۱۳۹۵
۷۲ص.
جدول نمودار
سي دي
دکتری تخصصی (PHD)
بیولوژی تولید مثل
۱۳۹۴/۱۱/۲۹
۱۹/۸
مقدمه: اسپرماتوژنز فرآیند سازمان یافته و مداومی است که طی آن مراحل متعدد تکثیر و تمايز سلولهای بنیادی اسپرماتوگونی (SSC: Spermatogonial Stem Cell) موجب تولید تعداد نامحدودی اسپرماتوزوآ در سراسر زندگی فرد می شود. از این رو حجم بالای این سلولها همواره در بیضه فرد مذکر مورد نیاز است. این فرایند در بیماران سرطانی تحت درمان با رادیوتراپی و شیمی درمانی ممکن است مختل شده و منجر به ناباروری این افراد پس از روند درمان گردد. یکی از روش های بازگرداندن باروری انجماد و پیوند SSC ها به این افراد می باشد. افزایش تعداد سلولهای بنیادی اسپرماتوگونی در سیستم های مختلف منجر به افزایش کارایی و موفقیت پیوند میشود. یکی از راههای نگهداری دراز مدت این سلولها انجماد آنها میباشد. از این رو به نظر میرسد استفاده از آنتی اکسیدانها برای مقابله با آزاد شدن رادیکالهای آزاد و جلوگیری از آسیبهای وارده به سلولها در طی فرایند انجماد موثر می باشد.مواد و روشها: SSCs از موشهای 6-3 روزه بعد از دو مرحله هضم آنزیمی جدا شدند و درصد خلوص سلولها با تکنیک فلوسایتومتری و نشانگر Stra8 بررسی شد. SSC ها با افزودن آنتی اکسیدان آلفاتوكوفرول و كاتالاز با دوزهای مختلف به محیط انجماد فریز شدند و پس از آن درصد زنده مانی، درصد خلوص سلولها، میزان بیان ژنهای آپوپتوتیک و میزان ROS داخل سلولی قبل و بعد از انجماد اندازه گیری گردید. سلولها با بهترین دوز آنتی اکسیدان از نظر زنده مانی به مدت یک ماه کشت و سپس به موش آزواسپرمی پیوند زده شدند و عملکرد سلولهای SSC ارزیابی شد . نتایج: ریت بقاء و درصد خلوص سلولهای فریز شده در حضور کاتالاز و آلفا توکوفرول به طور معنی داری بیشتر از گروه کنترل بود. قبل و بعد از فریز سطح بیان BAX در گروه حاوی کاتالاز و آلفا توکوفرول به طور معنی داری کمتر از گروه کنترل و سطح بیان ژن BCL2 در دو گروه مذکور به طور معنی داری بیشتر از گروه کنترل بود. تولید ROS در گروه کاتالاز و آلفا تو کوفرول به طور معنی داری کمتر از گروه کنترل مشاهده شد. همچنین بعد از یک ماه کشت بیان مارکرهای تمایز نیافته SSC در گروه کاتالاز و آلفا توکوفرول نسبت به گروه کنترل بیشتر مشاهده شد و پروسه اسپرماتوژنز در گروههای درمان شده با آنتی اکسیدان نسیبت به گروه کنترل بعد از پیوند بیشتر بود .نتیجهگیری: متد فریزینگ سلولهای SSCs در حضور آنتی اکسیدانها به افزایش ریت بقا و بهبود کیفیت سلولها بعد از فریز کمک میکند.